购物车 
高分辨G带生物技术实验(实验介绍，实验步骤，实验注意事项，实验所需试剂)
Release Time：2020-07-24一、高分辨G带技术简介：
高分辨G带技术中常用的G波段技术只能在人类染色体的单倍体中观察到320条波段，这不足以识别某些染色体结构异常，近年来，已使用诸如氨甲蝶呤之类的药物来同步细胞，并且已添加了诸如胸苷和BrdU之类的某些药物来防止染色体收缩。
在短时间内与低浓度的有丝分裂抑制剂秋水仙碱或秋水仙碱联合使用，可以获得大量的后期前期，前期和早期中期有丝分裂图像，这样，人类染色体中的单倍体带数可以增加到400、550和850，甚至可以增加到1200?2000，这对于进一步研究较小的染色体缺陷和基因定位具有重要意义。
二、高分辨G带技术所需的材料及试剂：
甲氨蝶呤、胸苷、无菌离心管、秋水仙碱、秋水酰胺、无菌Hank's溶液、BrdU、KCl、胰酶、 生长培养基（含PHA，pH = 7.0）、Giemsa、甲醇、冰醋酸
三、高分辨G带技术实验步骤
1.常规外周血培养54?56小时。
2.同步：同步药物可以是甲氨蝶呤或胸苷，如果使用甲氨蝶呤，将其添加到上述培养的外周血中，使终浓度为10?7 M；如果使用胸苷，则将其添加到培养的外周血中以使最终浓度达到0.3 mg / ml。同步需要添加上述药物，然后将其置于37°C下进一步培养17小时。
3.无菌（pH = 7.0）Hank溶液在无菌室中洗去培养物中的残留药物。方法是将同步培养物置于1000rpm的无菌离心管中的无菌室中，离心10分钟，吸出上清液，加入无菌Hank's溶液5?10 ml，用移液管分散沉淀物，底物细胞，然后以上述速度离心一次，吸去上清液，除去底物，然后再次洗涤细胞，并重复洗涤细胞两次。
4.新的培养：最后一次清洗细胞后，吸出上清液，并将底物细胞转移到另一种新鲜的生长培养基（含PHA，pH = 7.0）中。该生长培养基还需要添加以下物质：如果以前与甲氨蝶呤同步，此时应添加胸苷使终浓度达到10?5 M；如果以前与胸苷同步，则此时应加入BrdU，使最终浓度为10μg/ ml。然后置于37℃并继续温育6小时。
5.防止分裂：可以使用秋水仙碱或秋水酰胺。如果使用秋水仙碱，则添加至终浓度为0.5μg/ ml；如果使用秋水酰胺，将其添加至终浓度为0.05μg/ ml。再孵育15-30分钟。
6.低渗处理：在37°C下用0.050 M KCl进行预热，然后添加后处理30分钟。之后，根据常规方法进行预固定，固定，离心和片剂制备。
7. G条带化：常用的胰酶G条带化法（GTG条带化法），用低浓度胰酶（0.05％?0.01％）溶液处理标本20?60秒。
8. Giemsa染色：用1:20 Giemsa稀释液染色约20分钟。
9.核型分析：显微照相后，清晰地选择条带并分析具有更长染色体的染色体，以检查它们是否异常。
四、高分辨G带技术需要注意的事项：
1.产生高分辨率G波段的困难在于染色体分散和重叠差，这使得核型分析变得困难。因此，采用的方法是增加固定次数（在拍摄前固定三遍），或使用反向固定（即使用1份甲醇：3份冰醋酸），或在冰箱中存放24小时在拍摄之前，或使用较大距离（滴管距离载玻片1米以上）来滴下小片，以促进均匀分散和减少重叠。
2.胶片制作后的G波段通常不要太长，这种情况与一般染色体G带产生相同。
3.在低浓度胰酶治疗期间，还需要一个试件来确定将来进行捆扎的最佳时间。
4.在同步培养的连续培养中，如果添加BrdU，则需要深色培养，可以将其包裹在黑纸中，也可以将其放置在深色纸盒中的培养箱中。
五、高分辨G带技术实验所需试剂清单：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 甲氨蝶呤 | DBK501886 | 186018-45-1 | |
| 2 | β-胸苷 | SS0954 | 50-89-5 | |
| 3 | 1.5ml尖底连盖高速离心管（灭菌） | F-EP015-H | ||
| 4 | 2ml圆底连盖离心管(灭菌） | F-EP020-H | ||
| 5 | Hanks平衡盐溶液(含酚红) | HC1153 | ||
| 6 | 秋水仙素荧光素 | BSH87942 | 66091-34-7 | |
| 7 | 5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU） | SS0879 | 59-14-3 | |
| 8 | KCL | JT0010 | 7447-40-7 | |
| 9 | 胰酶 | SS2237 | 8049-47-6 | |
| 10 | 吉氏色素 | SX0115 | 51811-82-6 | |
| 11 | 甲醇 | JT25999 | 67-56-1 | |
| 12 | 36%乙酸 | JT11990 | 64-19-7 |
