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单向免疫琼脂扩散实验（实验介绍，实验步骤，实验知识，实验所需试剂）
Release Time：2020-07-24一、单向免疫琼脂扩散实验介绍：
单向免疫琼脂扩散实验中在琼脂板上冲孔，孔中含有特异性抗体，并向孔中添加定量抗原，当抗原扩散到周围环境时，它们将与琼脂中的抗体结合形成白色沉淀环，其直径或面积与抗原浓度成正相关，同时，使用标准抗原或国际参考蛋白绘制标准曲线，该曲线可用于定量检测未知样品的抗原浓度（mg / ml或U / ml），可用于检测正常人或患者血清中IgG，IgA和IgM的水平。
二、单向免疫琼脂扩散所需材料及试剂：
标准马抗人IgG血清（抗体）、2％离子琼脂或生理盐水琼脂（使用0.9％生理盐水，含0.1％NaN3）、湿盒（加湿纱布）、含1％马抗人IgG抗体的琼脂板、单个稀释的血清样本进行测试（浓度分别为1 / 30、1 / 40和1/50）、工作标准参照蛋白、PBS（pH7.2，0.01M）、打孔（孔径3mm）和打孔模板、微量移液器。
三、单向免疫琼脂扩散步骤
（1）标准曲线的制作：
1.根据载玻片的大小，准备制作琼脂平板所需的1％离子琼脂，首先等分1/2量的2％盐水琼脂。例如，制备普通载玻片需要4ml 1％的离子琼脂，而对于2％盐水琼脂则需要2ml。融化后，放在平衡温度的56℃?60℃水浴中备用。
2.稀释抗体，并用pH 7.2 PBS稀释标准抗人IgG抗体，最终浓度是抗体效价的两倍。例如，如果血清滴度为1/140，则原始浓缩血清应稀释为1/70。并分装试管，分装量应等于2％盐水琼脂的量。
3.准备琼脂平板：将稀释的抗人IgG抗体在56℃水浴中预热约半分钟，然后将其倒入2％盐水琼脂试管中，使其融化并保持在56℃?60℃，并且用拇指阻塞管口，旋转试管1-2次以均匀混合抗体和琼脂（注意：混合抗体和琼脂时不要产生气泡），立即将其倒在载玻片上，然后等待其固化。
4.冲压：将琼脂板放在模板上，并用打孔器在同一直线上打5个孔，孔间距为10mm。
5.稀释不同浓度（工作标准液）的标准参考蛋白：工作标准液中的免疫球蛋白含量IgG是100单位/毫升，80.4微克/单位，稀释的范围是1 / 10、1 / 20、1 / 40、1 / 80以及1/160。
6.剂量：用微量移液器向每个孔中加入10ul不同浓度的稀释的工作标准蛋白（注意：每次稀释应更换吸头）。
7.将取样的琼脂板放在潮湿的盒子中，然后放入37°C的培养箱中。 24小时后观察结果。
8.量并记录沉淀环的直径，然后以沉淀环的直径为纵坐标，以标准参考蛋白（单位/ ml）作为横坐标绘制标准曲线。
四、实验所需试剂清单：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 琼脂 | SW0007 | 9002-18-0 | |
| 2 | Sodium Azide | HCC344864 | 26628-22-8 | |
| 3 | 1000ul蓝吸头 | FT-1000 | ||
| 4 | 200ul黄吸头 | FT-200 | ||
| 5 | 生理盐水 | HC0869 |
