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TRIZOL抽提DNA实验（实验介绍,实验所需试剂,实验步骤,实验注意事项）
Release Time：2020-07-24一、TRIZOL方法抽提DNA实验简介：
二、TRIZOL方法抽提DNA实验所需试剂：
三、TRIZOL方法抽提DNA实验步骤：
可以除去中间层上剩余的水层，并且可以用乙醇从中间层和苯酚层中沉淀DNA。在初始均质化过程中，每1毫升TRIZOL添加0.3毫升无水乙醇，并通过反复颠倒混合样品。然后将样品在15-30°C下放置2-3分钟，然后在2-8°C下以不超过2,000×g的离心力离心5分钟以沉淀DNA。小心去除水样层，以保持提取的DNA的质量恒定。
2. DNA重组
用0.1 M柠檬酸钠（用10％酒精制备）洗涤DNA沉淀。最初均质化。在每次洗涤过程中，洗涤溶液和DNA沉淀应在15-30°C下反应30分钟（间隔混合），然后在2-8°C下以2,000x g离心5分钟。两次洗涤完成后，用75％的酒精（每1毫升TRIZOL添加1.5-2毫升的75％酒精）重悬DNA沉淀，并将其在15-30°C放置10-20分钟（定期混合）。在2-8°C下以2,000×g离心5分钟。
如果沉淀的DNA沉淀（>200μg）或样品中含有大量的非DNA物质，则需要再次用0.1 M柠檬酸钠（用10％酒精制备）溶液洗涤。
3. 重新溶解DNA
在打开的试管中风干DNA 5-10分钟。 （不要使用离心干燥；这将使DNA极难溶解。）使用8m M NaOH溶解DNA，大约比率为0.2-0.3μgDNA/μl。 ，每107个细胞或每50-70 mg组织添加300-600μl8m M NaOH。强烈建议用弱碱重新溶解DNA，因为提取的DNA不能很好地重新溶解在水或Tris缓冲液中。 8mM NaOH的pH值约为9，一旦将DNA放入其中，就可以用TE缓冲液调节。在此步骤中，将DNA样品（尤其是组织样品）以> 12,000xg的速度离心10分钟以去除不溶物。将含有DNA的上清液转移到新的试管中。 DNA至少可在4°C储存8 mM NaOH；如果长时间保存，则应使用HEPES将pH调节至7-8，并应向样品中加入1 Mm的EDTA。调节H值后，DNA可以保存在4°C或-20℃下。
4. DNA定量和预期产量：
取少量用8 mM NaOH稀释的DNA样品，将其与水以适当的比例混合，并测量混合物的A260值，然后根据双链DNA的A260值计算DNA含量。
5. 通过PCR扩增DNA：
将DNA重新溶解在8 mM NaOH中后，用0.1 M HEPES将pH调节至8.4。将0.1至1.0μg的DNA样品添加到PCR反应系统中并执行标准PCR反应。
6. 阳离子核酸内切酶消化反应：
可用1 mM EDTA（pH为7-8）透析DNA样品。每微克DNA加入3-5个单位。消化条件根据酶制造商的说明进行，反应时间为3-24小时。在标准测定中，80-90％的DNA是可消化的。
三、TRIZOL方法抽提DNA实验注意事项：
2.在75％的酒精中分解DNA可以在2-8℃下保存几个月。
3. 8 mM NaOH中的DNA可以置于2-8℃。要长期保存，请将其pH值调整为7-8，并将EDTA的浓度调整为1 mM。
五、TRIZOL方法抽提DNA实验所需试剂清单：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 10ul白吸头(灭菌) | FT-10-H | ||
| 2 | 2ml圆底连盖离心 | F-EP020 | ||
| 3 | 1.5ml尖底连盖离心管 | F-EP015 | ||
| 4 | EDTA | WSH44880 | 65501-24-8 | |
| 5 | NaOH | JT8650 | 1310-73-2 | |
| 6 | 无水乙醇 | JT26000 | 64-17-5 | |
| 7 | 柠檬酸钠溶液 | HC1962 |
