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带您学些HRP标记技术实验(实验介绍,实验步骤,实验所需试剂)

Release Time:2020-07-24

一、HRP标记的实验简单介绍
HRP标记的实验就是通过HRP(辣根过氧化物酶)可以催化ECL等化学发光试剂,而产生化学反应发光现象,或者通过催化DAB、TMB等底物反应进行显色的反应实验。 HRP标记山羊抗小鼠IgG (H+L)抗体是高纯的小鼠抗体,可以特异的识别出小鼠IgG重链和轻链,而同时对其它动物IgG无明显交叉反应,该方法具有本底低、灵敏度高等较为突出的优势
二,HRP标记实验操作步骤
 1. 取HRP 10毫克/毫升 5ml,溶液为棕黄色,加入0.06摩尔/升的NaIO4,5毫升,溶液立刻变为灰绿色,在4℃条件下静置约30min。
 2.加入0.16摩尔/升,5mL乙二醇毫升,溶液变回棕黄色,RT,静置30min。
 3.加入抗体 5毫克CB,4℃透析过滤。
 4.再加入5毫克/毫升 NaBH4 5毫升,加入后溶液有气泡产生,在室温下静置两小时。
 5. 50%饱和硫酸铵盐析一次,12000rpm,4℃离心30min。沉淀用5V毫升 0.01摩尔/升PB重悬。装入透析袋。
 6. 溶液在0.01摩尔/升PB,pH7.4中透析过滤。
三,HRP标记实验所需试剂
 1) 10毫克/毫升 HRP、0.06摩尔/升NaIO4、0.16摩尔/升乙二醇、2.5毫克/毫升 NaBH4、0.01摩尔/升L磷酸盐缓冲液,pH7.4、碳酸盐缓冲液(Na2CO3 0.7952克NaHCO3 1.4702克溶于500毫升蒸馏水中,调pH值到9.5)、
序号 名称 货号 CAS 备注
1. HRP(辣根过氧化物酶) SS2255  9003-99-0  
2. IgG SC0364 10047-33-3  
3. NaIO4 JH0604 7790-28-5  
4. 乙二醇 JT25994 107-21-1  
5. NaBH4 HCC344871 16940-66-2  
6. 硫酸铵 CJ0207 7783-20-2  
7. 碳酸钠 JT0602 497-19-8  
8. NaHCO3 SS1340 144-55-8  
9. 磷酸盐缓冲液 HC1488    
以上为HRP标记实验所需的试剂。


 
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