怎么做细胞爬片免疫组化染色实验
Release Time:2020-07-20一.细胞切片的免疫组织化学染色实验简介:
通过将玻片浸入细胞培养基和在玻片上生长的细胞来进行细胞玻片的免疫组织化学染色。它主要用于组织学和免疫组织化学。 ,冷冻切片,细胞涂片,原位杂交等
二.进行免疫组织化学染色实验所需的试剂:
乙醇二甲苯苏木精; PBS缓冲液;3,3′-二氨基联苯胺(DAB)
三.细胞切片免疫组织化学染色实验的操作步骤:
1.取出细胞切片,迅速放入冷丙酮中固定20-30分钟。 2.在蒸馏水中浸泡两次,每次约5分钟。 3.在冲孔液中浸泡5分钟。 4.在蒸馏水中浸泡两次,每次约5分钟。 5.使用普通血清密封:从染色罐中取出切片,擦去切片背面的水分和切片正面组织周围的水分(以保持组织湿润),并添加正常的山羊血清或兔血清(与二抗相同)动物血清)处理,并在37°C下保持约15分钟。 6.再次添加一抗:用滤纸吸收血清,无需洗涤,直接在37℃下添加一抗约2小时(也可以在4℃的冰箱中放置过夜)。 7.在PBS缓冲液中:5分钟,2次(置于摇床上)。 8.在37℃,40分钟内逐滴添加生物素化的二抗。 9.在PBS缓冲溶液中:约5分钟,2次(置于摇床上)。 10. 37℃40分钟,再次滴加第三抗体(SAB复合物)。 11.在PBS缓冲溶液中:5分钟,2次(置于摇床上)。 12. DAB显色,在显微镜下观察,并及时终止(终止自来水冲洗)。 13.用自来水(纯净水)彻底冲洗。 14.苏木精复染,室温下30秒钟,用自来水冲洗。 15.用自来水冲洗15分钟,以恢复蓝色。 16.梯度酒精脱水:80%,2分钟,95%,2分钟,100%,2次,5分钟。 17.二甲苯透明:I和II(二甲苯)各5分钟18.安装:加拿大胶(或中性胶)
四、胞攀爬玻片的免疫组化染色注意事项:
1.步骤3和4仅用于检测细胞内抗原,而在检测细胞膜抗原时不使用。 2.正常血清的制备步骤:用PBS以1:20的比例制备,并以50μl+ 5μl(10%喷雾量)计算每片所需的量。
五、细胞爬片免疫组化染色实验所需试剂清单
序号 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
1 | PBS缓冲液 | HC2031 | ||
2 | 苏木精 | SX0217 | 517-28-2 | |
3 | 乙醇 | JT26000 | 64-17-5 | |
4 | 二甲苯 | JT24017 | 1330-20-7 | |
5 | 3,3'-二氨基联苯胺 | JT9459 | 91-95-2 |