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FISH（即荧光原位杂交）技术
Release Time：2020-07-19一、FISH（即荧光原位杂交）技术实验原理
FISH（即荧光原位杂交）技术作为分子诊断的重要工具，在科研和临床诊断领域都有着广泛的应用。FISH检测是利用荧光基团标记DNA探针，再将标记的DNA探针与样本DNA进行原位杂交，最后在荧光显微镜下对荧光信号进行计数，以此作为诊断的依据。FISH的操作简便快捷，结果直观准确，因此FISH成了许多疾病诊断的首选工具。下面我们将从探针的设计，样本的制备，原位杂交和检测结果的观察等几个方面简单介绍FISH的操作。
探针是FISH检测灵敏度和准确性的关键。FISH检测的准确性来源于探针的设计。FISH能否应用于某一领域也取决于是否具有相应的探针。用于FISH检测的探针必须具备很高的特异性，能特异性地识别特定的基因或染色体上特定的片断。而且FISH的探针必须能经受原位杂交的处理而不变性。荧光基团的标记也直接影响了检测的灵敏度和原位杂交结果的检测方式。
二、样本的制备：
1. 1000转/分离心羊水（AF）5分钟。羊水应没有血色或褐色。
2. 用2-5ml的1×胰酶/EDTA溶液（0.05%胰酶，0.53MEDTA4Na的Hank氏平衡盐溶液，不含CaCl2、MgCl2.6H2O、MgSO4.7H2O）悬浮沉淀，37℃水浴15分钟以上
3. 1000转/分离心5分钟
4. 用2-5ml的0.56%KCl溶液悬浮细胞，37℃水浴20分钟。这些处理步骤的目的是使羊水细胞成为悬浮的单细胞。
5. 加0.8-2ml的固定液（3∶1甲醇∶冰醋酸）至细胞低渗液中，轻轻混匀
6. 1000转/分离心悬液5分钟，用1ml新的固定液重新悬浮细胞。4℃保存固定的样本30分钟以上，直至FISH检测前。若要长期保存，-20℃保存在固定液中
7. 制片前根据悬浮细胞数调整悬液的体积。若储存时间超过一个月以上，在制片前用固定液清洗细胞
8. 直接滴加细胞悬液至1-2片预冷的玻片上，每片2个杂交区（每个区域15-25霯细胞悬液）
三、实验所需仪器：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS号 | 备注 |
| 1 | KCL | JT0010 | 7447-40-7 | |
| 2 | 甲醇 | JT25999 | 67-56-1 | |
| 3 | EDTA溶液 | SS0008 | 6381-92-6 | |
| 4 | FT-200 | 200ul黄吸头 | ||
| 5 | F-EP020 | 2ml圆底连盖离心 |
