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氯化三苯四唑（TTC）方法测定根系活力
Release Time：2020-07-17一、实验原理：
氯化三苯四唑（TTC）是一种氧化还原物质，标准氧化还原电势为80mV，可将水转化为无色溶液，但还原后会生成红色而不是水的三苯甲氧基（TTF），如下：
生成的TTF相对稳定，不会被空气中的氧气自动氧化。因此，TTC被广泛用于酶测试的氢受体。通过添加琥珀酸，富马酸和苹果酸可以增强植物根引起的TTC减少。 ，TTC减少的量可以表明脱氢酶的活性，并可以作为根系活性的指标。 ，并被丙二酸，碘乙酸抑制。
二、实验仪器试剂
分光光度计分析天平（灵敏度0.1mg）； 1个恒温器； 1个迫击炮; 100ml锥形瓶;漏斗; 10ml 1个移液器，2ml 1个移液器，0.5ml 1个移液器; 20ml带刻度的试管； 10ml容量瓶；小培养皿;试管架，药勺适量的石英砂。
三、试剂
| 序号 | 产品 | CAS号 | 货号 | 备注 |
| 1 | 甲醛 | 50-00-0 | JT12051 | |
| 2 | 连二亚硫酸钠 | 7775-14-6 | JT28005 | |
| 3 | 红四氮唑（TTC） | 298-96-4 | SX0036 | |
| 4 | 磷酸缓冲液（1 / 15mol / L，pH7.0） | HC1743 | ||
| 5 | 1mol / L硫酸 | 7664-93-9 | ||
| 6 | 琥珀酸钠/丁二酸钠 | 150-90-3 | JT12003 | |
| 7 | 石英砂 | 14808-60-7 | JT0063 |
亚连二硫酸钠（Na 2 S 2 O 4是一种强还原剂，通常称为保险粉）；
1％TTC溶液：精确称量1.0g TTC，少量蒸馏水，使体积达到100ml；
0.4％TTC溶液：准确称量0.4g TTC，少量蒸馏水，调至100ml；
磷酸盐缓冲液（1 / 15mol / L，pH 7.0）;
1mol / L硫酸：用量筒量取55ml比重为1.84的浓硫酸，边搅拌边加到装有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后更换为1000ml。
0.4mol / L琥珀酸钠：称取10.81g琥珀酸钠（含6份结晶水），蒸馏水，并调至100ml。
四、实验方法
1.定性确定
（1）配置反应溶液，以1：5：4的比例加入1％TTC溶液，0.4mol / L琥珀酸钠和磷酸盐缓冲液。
（2）仔细洗净根部，从茎干上取下地面部分，将根部放入三角烧瓶中，倒入反应溶液，以浸入的根部为度，在37°C的黑暗处放置1h。为了观察着色，几毫米的新根尖和薄的侧根变成红色，表明存在脱氢酶。
2.定量测定
（1）制作TTC标准曲线
将0.25ml 0.4％TTC溶液移入10ml容量瓶中，加入少许Na2S2O4粉末，并立即摇动以产生红色TTF。用于逐渐将音量调节至刻度并摇匀。然后分别将0.25ml，0.5ml，1.00ml，1.50ml，2.00ml的该溶液放入10ml容量瓶中，并用刻度定标，即含有TTF25μg，50μg，100μg， 150μg，200μg。将空白作为参考，在485 nm的波长下测量光密度，并输入入射的标准曲线。
（2）称取0.5g根样品，加一个小培养皿（空白试验中先加硫酸，然后加根样品，其他操作相同），再加入10ml 0.4％TTC溶液和磷酸缓冲液混合至充分将根浸入溶液中，在37°C下于黑暗中孵育1小时，然后添加2 ml 1 mol / L硫酸以终止反应。
（3）研磨根提取物，吸收水分，并用3?4ml的浓度和少量石英砂研磨以提高TTF。将红色提取液转移到试管中，少量洗涤残留物两次或三遍，然后转移到试管中。最后加入甲酸使体积为10ml，用分光光度计比较485nm处的颜色，以空白为参照校正光密度，检查标准曲线确定四唑的还原量。
五、计算
将获得的数据代入下式以获得四唑还原强度。
