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X-Gal的作用机理及IPTG-X-gal片剂生产实验
Release Time：2020-07-17一、X-Gal的作用机理及IPTG-X-gal片剂的生产方法实验简介：
X-Gal在β-半乳糖苷酶的催化下水解成蓝色，因此常用于转基因筛选测试，例如蓝点和白点筛选或β-半乳糖苷酶原位染色检测实验，在蓝点和白点测试中，可以根据菌落的颜色简单地选择转化子。
分子式为:C 14 H 15 BrClNO 6，分子量为:408.63，CAS号:7240-90-6。
X-Gal是β-半乳糖苷酶的底物，水解后呈蓝色。基于此功能，当以lacZ缺陷型细胞为宿主转化pUC系列载体DNA（或其他带有lacZ基因的载体DNA）时，或者当用X13 Gal和IPTG进行M13噬菌体载体DNA转染时，由于α β-半乳糖苷酶的互补性可以根据是否存在白色菌落（或噬菌斑）轻松选择基因重组体。
二、X-Gal的作用机理及IPTG-X-gal片剂的生产方法实验所需材料及试剂：
二甲基甲酰胺（DMF）溶液
琼脂培养基IPTG
IPTG粉末
氨苄
卡那抗生素
三、X-Gal的作用机理及IPTG-X-gal片剂的生产方法实验步骤
1.首先将X-Gal制成20 mg / ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液（在-20°C下黑暗保存），然后将200μl的上述溶液和100μl的上述溶液添加到100 ml琼脂培养基IPTG中（24 mg / ml）和100μlAmp（100 mg / ml）制成X-Gal，IPTG，Amp平板培养基，将DNA片段插入pUC系列载体（或其他带有lacZ和Amp基因的载体）中，然后转化为缺失lacZ的细胞时，可以将上述X-Gal，IPTG和Amp平板培养基包被以根据细菌生长和白色，方便地选择基因重组体（白色是带有DNA插入片段的基因重组体）。
2. IPTG存储解决方案配置：IPTG通常配制成20％（m / V）（约0.84M）的母液，称取0.5 g IPTG粉末，用2 ml蒸馏水完全溶解，将蒸馏水加至2.5 ml，过滤并用孔径为0.22μm的小型注射过滤器进行灭菌（预先安装了用于灭菌的滤膜），-20在℃冻结。
3. X-gal储备溶液的配置：将X-gal制备的20 mg / ml储备溶液与二甲基甲酰胺溶解，称重0.2克X-gal，加入10毫升二甲基甲酰胺（DMF），溶解并储存在一个小的血清瓶中，装有X-gal溶液的血清瓶必须用铝箔包裹，以防止暴露在光线下，损坏，应在-20°C下保存， X-gal溶液无需通过过滤灭菌。
4. IPTG-X-gal平板制备：将40 µL X-gal储备溶液和5 µL IPTG储备溶液添加到氨苄或卡那抗生素平板上（如果体积太小，包衣将是均匀的，可以涂布后适当稀释），均匀涂布并干燥后再使用。使用前1小时准备。
四、X-Gal的作用机理及IPTG-X-gal片剂的生产方法实验注意事项：
1.培养噬菌体时，在顶级琼脂中的添加量为：50μl/ 3 ml（20mg / ml）。
2.含X-Gal的培养基应在4℃的黑暗环境中保存，必须在1-2周内使用。
3.为便于实验操作，还可以根据细菌溶液的体积和板数来计算X-gal和IPTG储备溶液的浓度，并直接添加到准备用于包被的细菌培养液中。盘子。涂层平坦，因此可以节省测试时间。如果培养后生长的菌落的蓝色和白色斑点不够明显，可以将板放入4度冰箱中，一段时间后，菌落的蓝色和白色斑点将更加清晰。
五、实验所需试剂清单：
| 1 | N,N-二甲基甲酰胺 | JT11999 | |
| 2 | 氨苄青霉素（氨苄西林） | DBK500037 | |
| 3 | IPTG | HC1600 | |
| 4 | PDA琼脂培养基 | HC1024 | |
| 5 | 卡那霉素 B | SS0550 |
