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TRIzol RNA提取方法
Release Time：2020-07-15一，简单介绍
RNA定量方法和DNA在数量上相似。 RNA在260nm波长处具有最大的吸收峰。因此，可以通过260nm波长光谱法测量RNA浓度，并且OD值1等于约40μg/ ml的单链RNA。如果您使用1cm的光路，则用ddH2O稀释DNA样品n次并将ddH2O用作空白对照。
可以根据此时读出的OD260值计算样品稀释前的浓度：
RNA（mg / ml）= 40×OD260读数×稀释倍数（n）/ 1000
纯RNA的OD260 / OD280比为2.0，因此可以基于OD260 / OD280比估算RNA的纯度。如果比率低，则有残留蛋白存在;该比例太高，表明RNA被降解。
二，试剂准备
1. TRIzol试剂。
2.氯仿
3.异丙醇
4. 75％乙醇（由DEPC H2O制备）
5. DEPC H2O5. DEPC H2O
三，操作步骤
1.样品处理：
(1)培养细胞：收获细胞1-5×107，转移1.5ml离心管在其中，加入1ml Trizol，混合均匀，在室温下静置5分钟。
(2)组织：取50-100mg组织（新鲜或-70℃，组织保存在液氮中）置于1.5ml离心管中，加1ml Trizol充分匀浆，在室温下静置5min。
2.加入0.2ml氯仿，振摇15s，静置2min。
3. 4℃离心12000g×15min，取上清液。
4.加入0.5ml异丙醇，将试管中的液体轻轻混合，然后在室温下静置10分钟。
5. 4℃离心12000g×10min，弃去上清液。
6.加入1ml的75％乙醇，轻轻洗涤沉淀。 4℃7500g×5min，弃去上清液。
7.干燥，加入适量的DEPC H2O溶解（65℃10-15分钟）。
四，注意事项
1．样品量和Trizol的加入量一定要按步骤(1)的比例，不能随意增加样品量或减少Trizol量，否则会使内源性RNase的抑制不完全，导致RNA降解。
2.实验过程中必须严格防止RNsae污染。
五， 实验所需清单
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | TRIzol试剂 | HC1336 | ||
| 2 | 氯仿 | BDM000285 | 67-66-3 | |
| 3 | 乙醇 | JT26000 | 64-17-5 | |
| 4 | 异丙醇 | JT25997 | 67-63-0 |
