一、DIGE荧光差异凝胶电泳简单介绍
※ DIGE荧光差异蛋白表达分析系统在传统的二维电泳技术的基础上结合了多种荧光分析方法，并在同一凝胶上分离出多个标记了不同荧光的样品，并首次引入了内标的概念。大大提高了结果的准确性，可靠性和可重复性。在DIGE技术中，每个蛋白质斑点都有自己的内标，并且软件会根据每个蛋白质斑点的内标自动校准其表达，以确保检测到的蛋白质丰度变化是真实的。 DIGE技术可以检测样品之间的蛋白质表达差异小于10％，并且统计可靠性达到95％以上。
※ 尽管荧光染料的类型很多，但是用于蛋白质组样品标记的荧光染料与普通荧光染料不同。标记的蛋白质的等电点不应有变化，分子量的变化也应保持最小，并应由不同的荧光染料引起。分子量的变化应一致。用于蛋白质预标记的荧光染料分为两类，最小标记和饱和标记。其中，最小的标记荧光染料包括三种类型的Cy2，Cy3和Cy5。这三种荧光染料的化学结构相似，分子量接近，并且具有相同的活化基团-NHS脂质，可以在赖氨酸残基的ε氨基上进行特异性标记，因为这三种染料均具有正电荷，反应蛋白的等电点不会改变，从而确保不同样品中的相同蛋白可以游到相同位置。但是，应注意的是，过多的染料标记将导致蛋白质疏水性增加，并且不易溶解。保留1到2％的蛋白质的赖氨酸残基（通过荧光标记修饰）可以在电泳过程中保持标记蛋白质的溶解度。因此，在标记样品时，请确保蛋白质与染料的适当摩尔比达到“重要”。通过调节适当的pH值，适当的染料和蛋白质摩尔比，可以确保每个蛋白质分子最多被一个染料分子标记，以确保蛋白质的分子量变化最小。

二，主要特点：
※ DIGE荧光差异分析，用于检测蛋白质表达的真实生物学差异并量化差异。
※ DIGE技术在蛋白质组学研究中结合了经典的二维电泳技术和独特的多重荧光分析技术。
※ 将不同的样品预先用具有匹配电荷和分子量的DIGE荧光标记物标记，然后混合并在同一凝胶电泳上运行。
※ 常规检测蛋白质表达差异小于10％，统计置信度为95％。

三，实验过程
1.为了保证实验的顺利进行，必须对样品进行预实验，以检查甲方提供的样品是否合格。
2.初步实验成功完成后，进行正式实验。电泳之前，用Cy2，Cy3和Cy5荧光染料标记蛋白质样品（包括蛋白质内标），将标记的蛋白质样品在同一块凝胶上混合。进行二维电泳。用三种不同的激发波长获得电泳结果，得到不同颜色的荧光信号，并根据这些信号的比例确定样品之间的蛋白质差异。 DIGE技术可以检测样品之间的蛋白质表达差异小于10％，并且统计可靠性达到95％以上。
3.质谱法（包括凝胶内消解，串联质谱法和数据库搜索）
4.蛋白质斑点的质谱鉴定：通过MASCOT数据库搜索质谱数据，以确定与蛋白质斑点相对应的基因

四，主要应用：
DIGE技术用于通过分析不同治疗和不同生长条件下不同类型的细胞，组织或蛋白质表达差异来研究疾病的分子机制，分子诊断，药物作用机制，毒理学等。广泛使用。特别是，通过将各种疾病组织与正常组织进行比较，可以获得某些特定疾病（例如肿瘤）的标记蛋白，并将这些获得的蛋白用作疾病分子诊断或进一步疾病治疗和药物开发的标记有价值的信息。 DIGE是蛋白质组学研究中最可靠，最准确的技术之一。该技术已被许多著名的蛋白质组学研究部门验证和认可。 DIGE技术已用于人类，大鼠，小鼠，真菌，细菌等各种样品，主要用于蛋白质组学，例如各种肿瘤研究，寻找疾病的分子标记，揭示药物作用的分子机制还是毒理学研究。

五，实验所需清单