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牛肉膏提取蛋白胨培养基的特性及制备步骤

Release Time:2020-07-15

一、牛肉膏提取蛋白胨培养基实验介绍
※ 牛肉膏提取蛋白胨培养基是使用最广泛,最常见的细菌基础培养基之一,有时也称为普通培养基。它包含牛肉提取物,蛋白ept和氯化钠。其中,牛肉提取物为微生物提供碳源和能源,磷酸盐和蛋白and主要提供氮源,而氯化钠则提供无机盐。当制备固体培养基时,添加一定量的琼脂作为凝结剂。琼脂在96℃下以常用浓度溶解。通常,将其与石棉网在沸水浴中或沸水浴中煮沸,以防止琼脂燃烧。琼脂在40°C下固化,通常不会被微生物分解。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和温度而变化。
※ 由于这种培养基主要用于培养细菌,因此有必要用稀酸或碱将pH调节至中性或弱碱性,以促进细菌的生长和繁殖。
※ 牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:
序号 产品 CAS号 货号 备注
1 牛肉膏 68990-09-0 SS0628  
2 蛋白胨  68308-36-1 SS6091  
3 氯化钠 7647-14-5 JT0001  
4 琼脂 9002-18-0 SW0006  
5 氢氧化钠 1310-73-2 JT8650  
6 氯化钠 7647-14-5 JT0001  
牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂15-20g、1000ml、pH 7.4-7.6pH 7.4-7.6
二、设备与器材
牛肉提取物,蛋白胨,NaCl,琼脂;、1mol / L NaOH,1mol / L HCl;
试管,锥形瓶,烧杯,量筒,玻璃棒,介质分配器,扭矩秤,角勺,高压蒸汽灭菌器,pH试纸(pH 5.5-9。0),棉,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等

三、制作牛肉膏蛋白胨培养基的步骤
1.称重
根据培养基配方的比例,将牛肉提取物,蛋白胨和NaCl准确称入烧杯中。牛肉酱通常用玻璃棒挑出,在小烧杯或观察杯中称重,溶于热水,然后倒入烧杯中。也可以将其放在称量纸上,称量后直接放入水中。此时,如果将其稍加加热,牛肉糊将与称量纸分离,然后立即将纸页移开。蛋白胨吸湿性强,称重时移动迅速。另外,在混合药物时,应严格防止药物混合。羊角面包用于一种药物,或在服用一种药物后,将其洗涤并干燥,然后称重另一种药物。不要在瓶子上盖错盖子。
2.融化
在上述烧杯中,您可以先添加少于所需量的水,用玻璃棒充分搅拌,然后在石棉网上加热使其溶解。药物完全溶解后,加水至所需总体积。如果准备了固体培养基,则将称量的琼脂放入溶解的药物中,然后加热使其溶解。在琼脂溶解过程中,需要搅拌以防止琼脂糊破坏烧杯。最后补上丢失的水。
3. PH调整
在调节pH值之前,首先要用精密pH试纸测量培养基的原始pH值。如果pH呈酸性,则用滴管将1mol / L NaOH滴加到培养基中,边搅拌边添加,并随时用pH试纸测量其pH值直至pH达到7.6。否则,请使用1mol / L HCl进行调整。请注意,不应将pH值调节得太远,以免发生回调,否则会影响介质中离子的浓度。
对于某些需要更准确pH值的微生物,可以使用酸度计调节pH值(有关用法,请参阅相关说明)。
4.过滤器
趁热时,用滤纸或多层纱布过滤以利于观察结果。如果没有特殊要求,则可以省略此步骤(此实验中无需过滤)。
5.包装
根据实验要求,所制备的培养基可以分为试管或锥形瓶。包装设备见图Ⅴ-1。
在填充过程中,请注意不要让培养基粘附在试管或瓶子的嘴上,以免污染棉塞并造成污染。
1)液体包装和包装的高度优选为试管的高度的约1/4。
2)用于固体分装和分装的试管不得超过试管高度的1/5。灭菌后,应将其制成斜坡,如图V-2所示。分开的锥形瓶的体积不应超过锥形瓶的一半。
3)半固体分装试管通常适合试管高度的1/3,并在灭菌后垂直凝结。
6.加塞
填充培养基后,将棉塞放在试管或三角瓶的嘴上,以防止外部微生物进入培养基并造成污染,并确保良好的通风性能(将棉塞的方法固定在背面此实验)。
7.绷带
堵塞后,将所有试管用麻绳绑起来,然后在卫生棉条上缠上一层牛皮纸,以防止灭菌过程中的冷凝水弄湿卫生棉条。使用标记指示介质名称,组和日期。塞子装满牛皮纸后,用麻绳将绳子包裹成松散的结。使用时很容易解开它。另外,使用标记指示介质名称,组和日期。
8.杀菌
通过在121.3℃下以1.05kg / cm 2(15lb / in 2)高压灭菌20分钟,将上述培养基灭菌。如果由于特殊情况不能及时消毒,应将其放在冰箱中暂时存放。
9.搁置斜面
将灭菌后的试管培养基冷却至约50℃,将试管的棉塞端置于玻璃棒上,倾斜面的长度优选为试验总长度的一半以下。管。
10.无菌检查
将灭菌后的培养基放入37℃的温室中24-48小时,以检查灭菌是否完成。



 
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