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3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合实验

Release Time:2020-07-09

一、实验步骤:
1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中,并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液(如Tris或者甘氨酸),可以通过在PBS中透析或浓缩的方法除去。计算:蛋白质量(mg)/蛋白分子量(MW)=蛋白质的毫摩尔数。
2. 在打开之前,平衡生物素至室温。加2 mg Sulfo-NHS-Biotin于100 ul 超纯水中,加入足够量浓度的生物素,一般对于10 mg/ml 蛋白来说超过12倍分子数,对于2 mg/ml 蛋白溶液应超过20倍,或者该试剂也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中
3. 室温30分钟,或冰上放置2小时。
4. 用30 ml PBS预洗纯化柱,上样,加入与欲收集量相同的缓冲液,收集0.5 ml 或1 ml 于单独的管中。
5. 以280 nm 的吸收值测定蛋白含量。
6. 生物素化的蛋白4℃存放至使用,可加入叠氮钠、甘油等保存。
实验所需的试剂:
序列 产品名 货号 CAS号 备注
1 磷酸盐缓冲液 HC1789    
2 Tris SS1426  77-86-1  
3 甘氨酸 SS3763 56-40-6  
4 甘油 JT26018 56-81-5  
5 1000ul蓝吸头 FT-1000    
6 200ul吸头 FT-200    
7 2ml离心 F-EP020    
8 1.5ml离心管 F-EP015    



 
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