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质粒DNA提取实验
Release Time：2020-07-06质粒DNA提取实验
一、实验方法原理
碱裂解法是基于DNA变性和复性之间的差异来实现分离的目的。碱性使质粒DNA变性，然后将pH调节至中性以复性。复性是质粒DNA，但染色体DNA不会复性，并缠入网络材料中，可通过离心去除。
二、准备材料
2.仪器，耗材：超净台式培养箱摇床恒温水浴台式离心机液体提取器低温冰箱冷冻真空干燥机电泳仪卧式电泳槽紫外线观察仪
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS号 | 备注 |
| 1 | Tris-Hcl | HC2055 | ||
| 2 | EDTA | WSH44880 | 65501-24-8 | |
| 3 | NaOH | JT8650 | 1310-73-2 | |
| 4 | SDS | SS0013 | 151-21-3 | |
| 5 | NaAc | TDZ001793 | 132302-25-1 | |
| 6 | 异丙醇 | JSH64785 | 453-11-2 | |
| 7 | 溶菌酶 | YZM000117 | 9001-63-2 | |
| 8 | 无水乙醇 | JT26000 | 64-17-5 | |
| 9 | LB培养基 | HC1007 | ||
| 10 | FT-1000 | 1000ul蓝吸头1000ul Pipet Tips | ||
| 11 | FT-200 | 200ul黄吸头 | ||
| 12 | F-EP020 | 2ml圆底连盖离心 |
三、实验内容
材料和试剂的制备
（一）材料：大肠杆菌。材料和试剂的制备
（二）仪器：超净工作台，培养箱，振荡器，恒温水浴，台式离心机，集液器，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，卧式电泳槽，紫外线观察仪。
（三）试剂：
（1）溶液I：25 mM Tris-HCl（pH 7.4），10 mM EDTA（pH 8.0），50 mM葡萄糖，高压灭菌，并在4°C下保存。
（2）溶液II：现在使用0.2 M NaOH，1％SDS。
（3）溶液III：5N KAc pH4.8，高压灭菌并在4℃下保存。
（4）3 M NaAc pH5.2，高压灭菌并在4°C下保存。
- 异丙醇，溶菌酶（8 mg / ml），苯酚/氯仿，无水乙醇，70％乙醇，LB培养基，电泳试剂。
1.细菌繁殖：LB培养基，2ml / 20ml，37℃，200rpm，摇动过夜。
2.在4°C下以5000 rpm离心10分钟；丢弃液体。
3.用预冷的TES缓冲液洗涤沉淀（细胞），在4°C下以10 rpm，5000 rpm离心10分钟，加入预冷的1 ml溶液I，并冰浴10分钟。
4.重悬，加入150ul溶菌酶母液，在室温下静置5分钟。
5.加入1.2ml溶液II，并在冰浴上保持5分钟。
6.加入0.9 ml预冷的乙酸钾，充分混合，并在4°C下以12 000 rpm离心10分钟。添加1.5 ml异丙醇，并将其放入-20°C的冰箱中15分钟。在4°C下以12000 rpm离心10分钟。
7.取沉淀并将其悬浮在400 ul TE缓冲液中。
8.添加40ul 3M NaAc。
9.苯酚/氯仿，萃取，乙醇沉淀。
10.在4°C下以12000 rpm离心10分钟。
11.除去沉淀物，将其冷冻干燥，然后重悬于50ul TE缓冲液中。
12.通过电泳检测提取的DNA的质量。
