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质粒转化实验
Release Time：2020-07-06质粒转化
二、实验方法原理
将质粒DNA引入细菌的过程称为转化。该感受态细菌细胞在CaCl?低渗溶液中膨胀成球形。质粒DNA和CaCl?形成抗DNA酶羟基磷酸钙复合物，该复合物附着在细菌表面，并在42°C进行短时热休克处理，以促进DNA复合物的细胞吸收。在丰富的培养基上生长数小时后，球形细胞恢复并分裂并增殖。在转化的细菌中，表达外源基因。在选择性培养板上，可以选择所需的转化体（即含有质粒DNA的细菌）。用钙处理的感受态细胞通常每微克DNA获得10?至10?个转化子。除细菌的化学转化外，还存在电穿孔（electroporation），转化率可达10??10¹º个转化子/μg质粒DNA。
三、实验材料：
[设备]：1.培养皿2.恒温培养箱
[试剂]：1.LB培养基2.选择性LB琼脂培养板（含氨苄西林，终浓度50μg/ ml）3.氨苄西林100 mg / ml4.宿主细菌：用100 mmol / L CaCl?处理的感受态细菌DH5α
四、实验程序：
取50μL大肠杆菌感受态细胞，在冰浴中放置30分钟后添加适量的质粒（体积不得超过4μL），在42°C加热震荡90 s，立即将其放回冰中，冰浴2分钟加入400μLLB培养基在37°C摇动孵育45-60分钟;取50-100μL含氨苄西林（100μg/ mL）的LB固体培养基，在37°C下过夜。
一、实验简介
质粒的转化是指将质粒或以它为载体为重组植入的重组子引入细菌的过程。将连接产物转化为感受态细胞中，实现重组克隆的繁殖，替代后续分子操作（1）用于基因的克隆增殖；（2）选择目的细胞。二、实验方法原理
将质粒DNA引入细菌的过程称为转化。该感受态细菌细胞在CaCl?低渗溶液中膨胀成球形。质粒DNA和CaCl?形成抗DNA酶羟基磷酸钙复合物，该复合物附着在细菌表面，并在42°C进行短时热休克处理，以促进DNA复合物的细胞吸收。在丰富的培养基上生长数小时后，球形细胞恢复并分裂并增殖。在转化的细菌中，表达外源基因。在选择性培养板上，可以选择所需的转化体（即含有质粒DNA的细菌）。用钙处理的感受态细胞通常每微克DNA获得10?至10?个转化子。除细菌的化学转化外，还存在电穿孔（electroporation），转化率可达10??10¹º个转化子/μg质粒DNA。
三、实验材料：
[设备]：1.培养皿2.恒温培养箱
[试剂]：1.LB培养基2.选择性LB琼脂培养板（含氨苄西林，终浓度50μg/ ml）3.氨苄西林100 mg / ml4.宿主细菌：用100 mmol / L CaCl?处理的感受态细菌DH5α
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 90mm*15mm 塑料培养皿(灭菌） | FM-90-X | ||
| 2 | 90mm*20mm 塑料培养皿(灭菌） | FM-90-G | ||
| 3 | 10*10cm方形塑料培养皿(灭菌） | FM-100-F | ||
| 4 | LB培养基 | HC1007 | ||
| 5 | 氨苄西林 | YPZZ62128 |
四、实验程序：
取50μL大肠杆菌感受态细胞，在冰浴中放置30分钟后添加适量的质粒（体积不得超过4μL），在42°C加热震荡90 s，立即将其放回冰中，冰浴2分钟加入400μLLB培养基在37°C摇动孵育45-60分钟;取50-100μL含氨苄西林（100μg/ mL）的LB固体培养基，在37°C下过夜。
