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细胞计数实验
Release Time：2020-07-06细胞计数实验
一．实验目的
1.把握细胞计数方法。
2.了解区分细胞存活状态方法。
二．实验用品
0.4％台盼蓝溶液，无水乙醇或95％乙醇溶液，脱脂棉
普通显微镜,试管,稻草,毛细稻草,细胞计数板,绸布。
| 序号 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 0.4％台盼蓝溶液 | SX0153 | 72-57-1 | |
| 2 | 乙醇 | JT26000 | 64-17-5 |
三．实验原理
在细胞内培养在工作中，通常有必要了解细胞的生命状态并确定细胞死亡，确定细胞接种的浓度和数量，并了解细胞活力和增殖，例如通过酶消化鉴定细胞悬液中的细胞活力，恢复后冷冻的细胞进行活力测试等。制备细胞悬液后，通常用生命染料台盼蓝将细胞染色，然后进行细胞计数。锥虫蓝无法穿透活细胞的正常细胞膜，因此活细胞不会被染色。死亡细胞的细胞膜通透性增加，使染料进入细胞并使细胞着色（蓝色）。对于细胞计数，通常根据白细胞计数方法使用血细胞计数板进行计数，这便于确定细胞的生存条件。
四．实验内容与方法
（一）动物细胞悬液的制备
将动物细胞用生物盐水准备适当浓度的细胞悬液，以备将来使用。
（二）细胞计数
1.柜台板加工
用无水乙醇或用95％乙醇溶液擦拭计数板然后，用丝布擦拭盖玻片一件，盖上计数板上的盖板。
2.染色
用滴管画0.4％台盼蓝染料溶液，以1：1的比例添加到细胞悬液中。从计数板的边缘缓慢滴落以填充计数板和盖板之间的间隙。注意不要让液体流入相邻的凹槽或携带气泡，否则会重做。片刻后，将计数板放在低倍镜下（10×10倍）以观察计数。
3.计数方法
根据该图，计算计数板的四个大正方形（每个大正方形分为16个小正方形）中的像元数。计数时，仅对完整的细胞进行计数，如果将细胞聚集在一起，则将对一个细胞进行计数。在大正方形中，如果行上有单元，通常将较低的行单元不计为较高的行单元，将左侧的行单元不计为右的行单元。第二次重复计数的误差不应超过±5％（图7-1）。在显微镜下观察到，折射力强而不染色的是活细胞，而蓝色染色的是死细胞。
4.计数转换
计数后，必须计算每毫升悬浮液中的细胞数。由于计数板上每个正方形的面积为0.01 cm2，高度为0.01 cm，因此其体积为0.0001 cm3或0.1 mm3。由于1 ml = 1000 mm3，每个大正方形中的细胞数×10000 =细胞数/ ml，因此可以计算如下：
细胞悬液中的细胞数/ ml = 4个大细胞的总数/ 4×10000
如果在计数之前已被稀释，则可以乘以稀释倍数。
在计数细胞之后，计算细胞悬浮液的浓度，并计算存活细胞与死亡细胞的数量之比。
预防措施：
将细胞悬液滴入计数板时，应保持干净整洁，并且用量应适当。如果过多，则盖玻片将漂移，或者盖玻片将失败，因此需要重做。如果太小，很容易出现气泡。做;
在显微镜下计数时，如果网格中的细胞分布明显不均匀，则意味着细胞悬浮液混合不均匀，需要再次混合细胞悬浮液，然后再次计数。
如图7-1：
