琼脂糖凝胶电泳实验方法原理：
使用琼脂糖作为支持介质的电泳方法。分析原理与其他支持电泳法之间的主要区别在于，它具有“分子筛”和“电泳”的双重功能。

琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，而大分子物质在喘振时会受到大阻力，因此在凝胶电泳中，带电粒子的分离不仅取决于性质和数量净电荷的多少，还取决于分子的大小，从而大大提高了分辨率。然而，由于其相对较大的孔径，分子筛作用对于大多数蛋白质而言可以忽略不计，并且现在已广泛用于核酸研究中。

蛋白质和核酸根据不同的pH值将具有不同的电荷，并且电场中的力将不同，因此运行速度也不同。根据此原理，可以将它们分开。电泳缓冲液的pH在6和9之间，离子强度在0.02和0.05之间。 1％琼脂糖通常用作电泳的载体。琼脂糖凝胶可以区分大约100 bp的DNA片段。尽管其分辨率低于聚丙烯酰胺凝胶的分辨率，但它易于制备且分离范围广。普通的琼脂糖凝胶可以分离0.2-20 kb的DNA。使用脉冲电泳，可以分离高达107 bp的DNA片段。

在琼脂糖凝胶中游泳时，DNA分子具有电荷作用和分子筛作用。 DNA分子在等电点以上的pH溶液中带负电荷，并在电场中向正极移动。由于糖-磷酸主链的重复结构，相同量的双链DNA几乎具有相同量的净电荷，因此它们可以相同的速率移向正极。

琼脂糖凝胶电泳实验所需材料：

1.所需试剂：
   DNA、试剂盒、琼脂糖、TBE、电泳缓冲液、电泳上样缓冲液、溴化乙锭（EB）溶液、母液DNAGreen

2.所需仪器，耗材：

     卧式电泳仪，电泳仪，台式高速离心机，恒温水浴，微型移液枪，微波炉或电炉，紫外线透射仪，照片支架，相机及配件

琼脂糖凝胶电泳实验实验程序：

1.试剂准备

1. 5xTBE缓冲液：450 mmol / L三硼酸，10 mmol / L EDTA，pH 8.0。使用时，将上述存储溶液稀释至0.5倍TBE缓冲溶液10倍，可同时用作电泳和凝胶制备的缓冲溶液。

二，橡胶

1.根据凝胶量和凝胶浓度，向琼脂糖瓶中加入一定量的电泳缓冲液（琼脂糖粉的总液体量不得超过锥形瓶容量的50％）。

2.用保鲜膜或牛皮纸盖住锥形瓶的嘴，在膜或纸上打一些小孔，然后在微波中加热并溶解琼脂糖。加热时，当溶液沸腾时，戴上耐热手套并小心地摇动锥形瓶，以充分均匀地溶解琼脂糖。重复该操作几次，直到琼脂糖完全溶解。

3.让溶液冷却至约50°C-60°C。如有必要，添加溴化乙锭溶液（终浓度为0.5μg/ ml）或以1μL/ 30 mL的比例添加DNAgreen染料，并充分混合。

4.将琼脂糖溶液倒入橡胶模具中，然后将梳子插入适当的位置。凝胶的厚度通常在3至5mm之间。上胶模具如下图所示。对于小胶水，倒入约25-30 mL的琼脂糖溶液，对于大胶水，倒入约60-70 mL。如果需要切割和回收凝胶，可以适当地增稠凝胶。

5.让胶水在室温下凝固约30分钟至1小时。

三，装车

1.将适量的样品与6x上样缓冲液混合（例如：1μl样品和5μl6x上样缓冲液），然后用微量移液器小心地将其添加到样品孔中。

2.可根据样品浓度调节样品量。如果DNA含量低，则可以按照上述比率增加样品量，但总体积不得超过样品罐容量（通常小孔为40μl是上限，大孔为200μl是上限）。上限取决于粘合膜的规格。

3.添加每个样品后，请更换移液器吸头，以防止相互污染。装入样品时要小心，以免损坏凝胶或刺穿样品罐底部的凝胶。

4.电泳：

1）添加样品后，关闭电泳槽盖并立即打开电源。控制电压保持在110 V，电流大于40 mA。

2）当条带移离凝胶前端约2 cm（约40分钟）时，停止电泳。

3）拍照并在紫外线下观察。

实验预防措施：

1. 5×TBE缓冲液沉淀时间过长，因此请勿一次混合太多。电泳电泳缓冲液为0.5×TBE缓冲液，用5×TBE缓冲液原液稀释后即可使用。

2.用于电泳的缓冲液和用于凝胶制备的缓冲液必须统一。

3.琼脂糖粉不应在微波炉中加热太长时间。当溶液起泡沸腾时，请停止加热，否则会导致溶液过热和爆沸，从而导致琼脂糖凝胶浓度不准确并损坏微波炉。溶解琼脂糖时，必须确保琼脂糖完全溶解，否则电泳图像会模糊。

4.如果不立即使用凝胶，请用保鲜膜将其包裹，并在4℃下保存，一般可以保存2至5天。

琼脂糖凝胶电泳实验其他事项：

琼脂糖凝胶浓度和线性DNA的最佳分辨率范围

琼脂糖浓度最佳线性DNA分辨率范围（bp）

0.50% 1 000～30 000

0.7% 800～12 000

1% 500～10 000

1.20% 400～7 000

1.50% 200～3 000

2% 50～2 000

2%～5% 20～1,000