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提取大肠杆菌质粒DNA（大肠杆菌,实验简介,实验试剂,实验步骤,注意事项）
Release Time：2020-07-29一、提取大肠杆菌质粒DNA实验简介：
提取大肠杆菌实验过程中，质粒DNA的提取是军事基因工程工作中的一项基本实验技术。
二、提取大肠杆菌质粒DNA实验所需材料及试剂：
溶菌酶、1.5毫升尖底连盖离心管、1000ul蓝吸头、STET溶液、
三、提取大肠杆菌质粒DNA实验步骤：
1.将1.5毫升培养基倒入EP管中，并在4°C下以12000克离心30秒。
2.丢弃上清液，将试管倒入厕纸中几min以沥干液体。
3.将细菌沉淀物悬浮在120毫升 STET溶液中并涡旋混合。
4.加入10毫升新配制的溶菌酶溶液（10m克 / 毫升）并涡旋3秒钟。
5.将eppendorf管放入沸水浴中，并在50秒后立即取出。
6.在微量离心机中于4°C以12000克离心10min。
7.用无菌牙签清除eppendorf管中的细菌碎片。
8.取20毫升进行电泳检查。
四、提取大肠杆菌质粒DNA实验注意事项：
1.对大肠杆菌可从固体培养基上挑取单克隆菌落直接进行煮沸方法提取质粒DNA。
2.煮沸方法中添加溶菌酶有一定限度，浓度高时，细菌分裂效果反而不好。有时不同溶菌酶也能溶菌。
3.提取的质粒DNA将包含RNA，但RNA不会干扰进一步的实验，例如用裂解核酸内切酶消化，亚克隆和连接反应。
五、实验所需试剂清单：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 1000ul蓝吸头 | FT-1000 | ||
| 2 | 溶菌酶 | YZM000117 | 9001-63-2 | |
| 1.5毫升尖底连盖离心管 | F-EP015 |
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