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BCA法测定蛋白质浓度

Release Time:2020-07-17

一、简单介绍
BCA与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂,混合在一起即成为苹果绿,即BCA工作试剂。在碱性条件下,BCA与蛋白质结合时,蛋白质将Cu2 +还原为Cu +,一个Cu +螯合二个BCA分子,工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物,最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。
二,实验目的
掌握BCA法测定蛋白质浓度的原理。
三,实验操作
标准曲线的绘制:取试管七支,编号,点击表操作:

四,计算
(一)重新绘制标准曲线。
(二)以测定管吸光度值,查找标准曲线,求出待测血清中蛋白质浓度(g / L)。
(三)再从标准管中选择一管与测定管光密度相接近者,求出待测血清中蛋白质浓度(g / L)。

五,优缺点
(一)操作简单,快速,45分钟内完成测定,比经典的Lowary法快4倍且更加方便;
(二)准确灵敏,试剂稳定性好,BCA试剂的蛋白质测定范围是20-200μg/ ml,微量BCA测定范围在0.5-10μg/ ml。
(三)经济实用,除试管外,测定可在微板孔中就进行,大大节省样品和试剂用量;
(四)抗试剂干扰能力比较强,如去垢剂,尿素等均无影响

六,实验所需试剂和器材
器材:
(一)7220型分光光度计
(二)恒温水浴箱
(三)中试管7支
(四)枪式移液管
试剂:试剂A:1%BCA二钠盐、2%无水碳酸钠、0.16%酒石酸钠、0.4%氢氧化钠、0.95%碳酸氢钠、混合调PH值至11.25。
2,试剂B:4%硫酸铜。
3,BCA工作液:试剂A 100ml +试剂B 2ml混合
4,蛋白质标准液:用结晶牛血清白蛋白根据其纯度用生理盐水配制成的1.5mg / ml的蛋白质标准液。(纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定)
此法测定蛋白质浓度,近些年被科研工作者广泛选用。目前BCA法的试剂盒市面有售。总之,虽然蛋白质含量的测定方法很多,但是,还没有一个完美的方法。在选择测定方法时,可根据实验要求和实验室条件决定。
序列 产品名 货号 CAS 备注
1 碳酸钠 JT8648 497-19-8  
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