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石蜡切片及HE染色实验
Release Time：2020-07-10一、 石蜡切片
1. 材料: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm为宜. 取材时间越快越好.
2. 固定: 组织取下后应立即放入10%福尔马林固定.
实验注意事项:
(1). 固定液量应为组织块体积的40倍.
(2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等有关. 一般为3—24h.
(3)固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长.
(4)固定容器应大些.
3. 漂洗: 流水冲洗2—10h.
4. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精.70%(数分钟)→80%(60-120分)→90%(60-120分→95%(60-120分)→95%(60-120分)→100%(60-120分)→100%(60-120分)。
5. 透明: 组织块脱水后必须经过一种既能与酒精混合又能溶解石蜡的溶剂, 而使石蜡进入组织块. 常用二甲苯, 一般浸泡30m即可.
6. 浸蜡: 组织经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡. 一般需经2—3次浸渍才能完成, 总时间为3—4h. 用于浸蜡的石蜡熔点为52—56 ℃.
7. 包埋: 先将熔化的石蜡倒入包埋框再用加热的镊子将组织块放入. 包埋面必须平整. 包埋后石蜡稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固.
8. 切片: 修块→切片→展片→捞片→烤片.
二、 HE染色
1. 染色前切片处理
(1) 脱福尔马林色素.
(2) 脱汞盐结晶.
(3) 脱黑色素.
2. 染色实验步骤：
二甲苯脱蜡(10')_无水乙醇洗去二甲苯(2次)→95%酒精→90%酒精→85%酒精→自来水洗(2次)→苏木精染色(1—5次)→自来水洗(1次)→1%盐酸酒精分化20s左右→自来水洗(1'次)→稀氨水(1%)反蓝30s→自来水或蒸馏水洗(1')→伊红染色(20s—5min)→自来水洗(30s)→85%酒精脱水(20s)→90%酒精脱水(30s)→95%酒精(1')→95%酒精(1 ')→100%酒精(2')→100%酒精(2')→二甲苯(2')→中性树胶封片.
3. 染色结果: 细胞核呈兰色, 胞浆呈红色.
三、 盐酸酒精的配制
浓盐酸0.5—1ml + 75%酒精99ml.
此液用一段时间后需延长或更换液体, 新液体分化时间要短.
四、实验所需材料
| 序号 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 乙醇 | JT26000 | 64-17-5 | |
| 2 | 苏木精 | SX0217 | 517-28-2 | |
| 3 | 二甲苯 | JT24017 | 1330-20-7 | |
| 4 | 切片石蜡 | CG0207 | 8002-74-2 |
