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大肠杆菌感受态制备
Release Time：2020-07-08一、实验简介
通过该实验，掌握大肠杆菌感受态细胞的制备。
二，实验方法原理
细菌处于易于吸收称为感受态的外源DNA的状态。细菌在0℃的CaCl 2低渗溶液中，细菌细胞溶胀成球形。转化混合物中的DNA形成耐DNase的羟基磷酸钙复合物，该复合物粘附在细胞表面，并在42℃进行短时间的热激处理，以促进细胞吸收DNA复合物。
三、实验材料
1.低温离心机2.恒温摇床3.高压灭菌器4.恒温水浴5.培养皿6.细菌：DH577.100 mmol / L CaCl?（已灭菌）8. LB培养基（每升制备的培养基应加入950 ml去离子水中）9.胰蛋白胨10克10.酵母提取物5克
（注）1.NaCl 10 g摇动容器直至溶解，用5 mol / L NaOH（约0.2ml）将pH值调节至7.0，添加去离子水至1L的总体积，并高压灭菌20分钟。2.LB琼脂培养基：首先根据上式制备液体培养基，高压灭菌前加入16至18 g琼脂。
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS | 备注 |
| 1 | 90mm*15mm 塑料培养皿(灭菌） | FM-90-X | ||
| 2 | 10*10cm方形塑料培养皿(灭菌） | FM-100-F | ||
| 3 | 胰蛋白胨 | SS2171 | ||
| 4 | 酵母提取物 | SW0008 |
四、操作步骤
1.挑选一个大肠杆菌菌落，并将其接种在20mL LB培养基中，并在37°C振荡培养过夜。
2.以1％的接种量接种20mL LB培养基，并在37°C下以230 rpm的转速摇动230小时3小时。
3.取1ml培养物，冰浴30分钟，在4℃以4,000 r / min离心3分钟，然后除去上清液。
4.加入500 ul冰冷的0.1 mol / L CaCl 2溶液，重悬细菌沉淀，在4℃以4,000 r / min的速度离心3分钟，然后除去上清液。
5.添加100ul体积的冰冷的0.1 mol / L CaCl 2溶液，重悬细菌沉淀，在4°C下以4,000 r / min离心4分钟，然后除去上清液。
6. 50 ul体积的冰冷的0.1 mol / L CaCl 2溶液，将细菌沉淀重悬在冰浴中3 h-24 h，即大肠杆菌感受态细胞。
