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一、细胞凋亡检测实验方法原理
当发生细胞凋亡时，内源核酸酶被激活，并在核小体之间切割染色体DNA链以形成180至200个碱基或其倍数的DNA片段，并提取这些DNA片段进行电泳，DNA阶梯带（DNA阶梯）可以获得。

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二、细胞凋亡检测实验所学的材料
凋亡细胞
蛋白酶K、乙酸钾、白细胞裂解液、Tris-HCl、NaCl、 EDTA 、SDS、乙醇、琼脂糖、仪器，耗材、离心管离心机水浴电泳仪电泳槽

序列	产品名	货号	备注
1	蛋白酶K	SS2244-25mg
2	乙酸钾	JT0883-500g
3	白细胞裂解液
4	Tris-HCl（无菌）	HC2100-500ml
5	NaCl	JT0001-500g
6	EDTA二钠	SS0008-100g
7	SDS	HC1238
8	乙醇	JT26000-500ml
9	琼脂糖	SF0012-50g
10	10ul滤芯吸头	FT-10X-H
11	1.5ml离心管	F-EP015

 

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三、细胞凋亡检测实验的流程
1.材料和试剂的制备
1.物质：凋亡细胞。
2.蛋白酶K（500μg/ ml），乙酸钾氯仿（8 mol / L），无水乙醇，70％乙醇，2％琼脂糖凝胶。
3.白细胞裂解液：pH 8.0、10 mmol / L Tris-HCl，10 mmol / L NaCl，10 mmol / L EDTA，1％SDS。

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四、细胞凋亡检测实验操作步骤
1.收集凋亡细胞：取1?2×106细胞，离心后，用70％酒精（-20℃）固定2 h。
2.洗涤：取出用酒精固定的细胞，以1000 r / min离心5分钟，去除上清液，然后用PBS洗涤两次。
3.裂解细胞：加入400μl细胞裂解液，充分混合并加入100μl蛋白酶K，并在65°C水浴中消化2小时或过夜。
4.蛋白质处理：加入75μl8 mol / L乙酸钾，在4°C下放置15分钟，然后加入750μl氯仿，充分混合，以10000 r / min离心10分钟，然后将上清液转移至一支新的Eppendorf管。
5.沉淀DNA：添加750μl无水乙醇，轻轻颠倒混合，然后可以看到乳白色沉淀。如果不明显，可以将其置于-20℃过夜，以12000 r / min的速度离心10分钟，然后除去上清液。
6.洗涤DNA：加入1 ml 70％乙醇，充分混合，以10000 r / min离心5分钟，然后除去上清液。
7.溶解DNA：根据DAN沉淀物的大小加入一定量的蒸馏水或TE，并在37℃溶解。
8.确定DNA浓度。
9.在80 V下2％琼脂糖凝胶电泳2小时。

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五、细胞胞凋亡检测实验结果判断
出现梯形电泳带，最小的带为180-200 bp，其他带为其倍数。坏死细胞显示出弥散的电泳带，没有清晰可见的带。正常细胞的DNA条带分子量大且迁移距离短，因此它保持在孔附近。