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什么是生物指示剂?
      生物指示剂是通过使用一些最具抗药性的微生物菌株（例如芽孢杆菌或地芽孢杆菌）来评估任何医学或制药环境无菌性的最主要方法，而不是仅仅依靠满足物理和化学灭菌的要求 。 由于用作生物指示剂的微生物比药物或医学环境中常见的生物污染物浓度更高且具有更强的抵抗力，因此可以确定具有非活性生物指示剂的测试环境具有无菌性。
      但是，生物学指标很可能会被酶指标所取代。 与生物指示剂不同，酶指示剂使用热稳定的腺苷酸激酶，这是一种从嗜热的嗜酸性球藻细菌中分离出来的酶，这种细菌通常在通风口和温泉中发现。

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生物指示剂使用
      如果以建议的频率正确使用生物指示剂，则它们可以准确确定任何给定生命科学环境的无菌性。由于生物指示剂是高度耐药的微生物，因此可以肯定的是，任何使它们失去活性的灭菌过程也会杀死更常见，更弱的病原体。
       生物指示剂测试需要7天的潜伏期，才能确定结果，这是酶指示剂以超过净化周期性能的即时结果赶超市场的地方。不仅酶指示剂的结果是即时的，而且酶指示剂的制造可确保百分之一百的准确结果，从而消除了通常由生物指示剂测试引起的冗长而昂贵的假阳性调查。

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生物指示剂的应用：
※  生物指示剂在应用过程中贯穿了整个灭菌工艺验证的流程。灭菌工艺验证又涵盖了灭菌工艺开发以及灭菌程序确认两部分类容。常用的生物指示剂在进行生物监测指征，因为生物指示剂是可以最为直观的反应出微生物在经历灭菌后的存活程度，当然生物指示剂的应用领域并不仅仅局限于灭菌监测过程中使用。
???????※ 生物指示剂也可以应用于对灭菌设备性能确证的辅助过程中，以及应用在特定物品的灭菌工艺研发过程中。
???????※  生物指示剂也应用于终包装以及终容器内产品的灭菌工艺验证，当然可应用于无菌过程所使用的灭菌设备、灭菌材料以及包材组分灭菌工艺的验证。
※ 生物指标应用于已验证灭菌程序的定期再验证，生物指示剂还应用在隔离器和无菌洁净室灭菌工艺的验证评估过程中。

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如何使用生物指示剂
      生物学指标在灭菌之前将高抗性微生物引入给定的环境，然后再进行测量以测试当前灭菌过程的有效性。酶指示剂与生物学指示剂非常相似，仅在立即交付更准确，可量化的结果且成本仅与生物学指示剂相关的一小部分的情况下，即可达到相同的目的。

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为什么生物指示剂很重要?
       在生命科学环境的健康和安全方面，无菌性至关重要。通过使用生物指标定期测试此类环境的无菌性，可以确保免受更常见，抵抗力更弱的病原体的环境保护。但是，在确保医学环境中没有潜在有害或破坏性病原体的情况下，酶指标通过提供可100％保证性能的即时可量化数据，胜过其生物学指标。

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生物指示剂类型
       生物指示剂是已知细菌的制剂，具有稳定的，确定的抗性阈值和对各种灭菌过程的可预测响应。在实验室或无菌无尘室环境中，生物指示剂用于定期重新验证灭菌 协议并确认病原体灭活。
       灭菌监测中至少使用三种不同类型的生物指示剂，每种类型都使用已知的灭菌和耐灭菌程序的细菌芽孢。生物指示剂也可以掺入两种不同的微生物。

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生物指示剂–载体
      载体是包含孢子的容器（塑料，玻璃，滤纸等），并进行密封以保持微生物的活力。载体制作精良，设计成不会因生物指示剂要监测的灭菌过程而降解，因为这会损害生物指示剂的性能。包装本身还经过无菌生产程序，以确保其不含任何会影响生物指示剂稳定性或性能的污染物。

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生物指示剂–悬浮
      生物指示剂也可以存在于孢子悬浮液中，然后将其直接应用于要进行灭菌程序的产品，包装或表面。有时会在无菌性监测中使用接种产品的模拟，但是通常要求显示接受接种的最终产品不会改变生物学指标的有效性，从而导致无效结果。

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生物指示剂–自含指标
       独立的指示器带有包装，其中包含灭菌暴露后微生物潜伏期的恢复生长培养基。同时包含细菌孢子和生长培养基的自给式生物指示剂是封闭系统，可提供杀菌性。
      自给式指示器系统的抗灭菌能力取决于灭菌剂渗透包装所花费的时间。易于渗透通过在制造级别上的组成和设计来控制。这些类型的指示剂通常包含一种染料，以指示孵育后细菌孢子的阴性或阳性生长，并且样品已准备好在灭菌过程后直接进行孵育。

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生物指示剂的关键特征
       生物学指标按所用微生物的细菌名称，D值和每个载体的活孢子总量分类。生物指示剂样品的最重要特征之一是细菌必须准备好形成孢子，并且必须在选定的培养基上发生，如果任何孢子在去污规程中仍然存活，则发芽。

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生物指示剂的性能评估：
生物指示剂的主要指标有2项: 两项指标包括了孢子数量以及以D值为表征的对灭菌工艺的抗性属性。美国药典标准要求生物指示剂生产商能提供效期内的微生物的总数值，D值以及D值的测定方法等参数，实验员使用生物指示剂前能够对每个使用单位的平均菌落数进行测定、对生物指示剂D值进行科学的评估。

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以下是生物学指标的一些关键特征：

• 生物指示剂必须仅包含标签上指定的一种或多种微生物，并且至少通过表型鉴定，应验证该微生物是否正确。
• 传统上，生物指标种群小于1 x 106，因为据称无菌的设备，装置和空间被设计为可实现10-6个微生物的生存率
• D值或十进制减少值是微生物在暴露于规定的灭菌参数时所表现出的抗性水平。

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生物指示剂的存储
       生物指示剂的行为和抗孢子性都会受到环境条件（例如湿度）的影响。悬浮液和安瓿瓶应在2-8°C下冷藏。在悬浮液中，孢子与生长培养基不断接触，因此应对其进行冷藏以使其达到最佳生长温度并使其发芽。生物指示剂也应远离阳光直射，化学品和消毒剂保存，因为它可能损害生物指示剂并使无菌测试结果无效。

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生物指示剂的处理
      就像考虑洁净室的无菌性一样，人类是无菌环境中最大的污染源，这就是为什么它是处理生物指标时要考虑的重要因素。如前所述，生物指示剂载体将采用保护载体不受污染的材料包装，直到准备使用为止。但是，在进行无菌程序测试的培养时，对于人员遵循为清洁环境概述的衣服，去衣服和卫生程序很重要，因为这种做法还可以防止生物指示剂培养物受到污染。根据适当的规程和程序，为干净的环境穿衣可包括穿戴以下任何物品：蓬松的帽子，鞋子，口罩，胡须套，靴子，礼服，围裙，手套，工装，兜帽和鞋套。

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常用的生物指示剂：
脂肪芽孢杆菌制备生物指示剂：该菌具有无致病性、无热原、无毒，脂肪芽孢杆菌制备生物指示剂对压力蒸汽的抵抗力是所有微生物中最强的；
枯草芽孢杆菌孢子：干热灭菌法过程中最常用的生物指示剂是枯草芽孢杆菌孢子；
短小芽孢杆菌孢子???????：辐射灭菌法过程中最常用的生物指示剂是短小芽孢杆菌孢子；
缺陷假单胞菌???????：过滤除菌法实验中最常用的生物指示剂是缺陷假单胞菌。

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