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4大类常用生物类缓冲液配制方法
Release Time：2019-11-23一、通用缓冲液
0.5 M EDTA缓冲液，pH 8：适用于500 mL
1 M HEPES缓冲液：1 L
50万MES缓冲液：1升
1 M MOPS缓冲液：用于1 L
5 M NaCl溶液：用于1 L
10 M NaOH（= 10 N NaOH）：500 mL
1 M Tris缓冲液：1 L
琼脂糖凝胶电泳缓冲液50x TAE：1 L
6x DNA上样缓冲液：100 mL
10x DNA上样缓冲液：100 mL
SDS-PAGE缓冲液1.5 M Tris，pH 8.8（用于分离凝胶的储备缓冲液）1 L
1.5 M Tris缓冲液，pH 6.8（用于堆叠凝胶的储备液）1 L
10x Tris-甘氨酸运行缓冲液：用于4 L
2x样品上样缓冲液（非还原）：用于100 mL
2x样品上样缓冲液（减少）：1 mL
染色/脱色溶液：对于4 L：
定影液，1 L：
考马斯蓝原液：对于100 mL：
1x传输缓冲液：1 L
20x TBS缓冲液：4升
20x TBST缓冲液：对于100 mL
三、大肠杆菌生长培养基系列
LB培养基：1升
LB培养基（低盐）：1升
SOC：1升
1 M葡萄糖：100 mL
四、抗生素类缓冲液
氨苄西林（1000x）缓冲液：
羧苄青霉素（液体培养基1000x，平板2000x）缓冲液：
氯霉素（1000x）缓冲液：
卡那霉素（1000x，但自动诱导培养基为250x）缓冲液：
四环素（1000x）缓冲液：
0.5 M EDTA缓冲液，pH 8：适用于500 mL
- 将93.05 g Na2•EDTA•2H2O（二水合二钠）重悬于约400 mL 双蒸水（ddH2O）中
- 添加约9 g固体NaOH
- 所有NaOH溶解后，用10 N NaOH缓慢调节pH值
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至500 mL
1 M HEPES缓冲液：1 L
- 将238.3 g HEPES（游离酸）溶于800 mL 双蒸水（ddH2O）
- 用10 N NaOH将pH调节至所需值
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至1 L
50万MES缓冲液：1升
- 将97.6 g MES（游离酸）溶于800 mL 双蒸水（ddH2O）
- 用10 N NaOH将pH调节至所需值
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至1 L
1 M MOPS缓冲液：用于1 L
- 将209.3 g MOPS（游离酸）溶于800 mL 双蒸水（ddH2O）
- 用10 N NaOH将pH调节至所需值
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至1 L
5 M NaCl溶液：用于1 L
- 将292.2 g NaCl溶解在1 L 双蒸水（ddH2O）的最终体积中
10 M NaOH（= 10 N NaOH）：500 mL
- 将200 g NaOH溶解在最终体积为500 mL 双蒸水（ddH2O）中
1 M Tris缓冲液：1 L
- 将121.1 g Tris碱溶于800 mL 双蒸水（ddH2O）
- 用浓盐酸调节pH至所需值
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至1 L
琼脂糖凝胶电泳缓冲液50x TAE：1 L
- 将242.2 g Tris碱溶于约600 mL的双蒸水（ddH2O）
- 缓慢加入57.1 mL冰醋酸
- 加入100 mL 0.5 M EDTA，pH 8
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至1 L
6x DNA上样缓冲液：100 mL
- 在100 mL量筒中称取60 g甘油
- 加入12 mL 0.5 M EDTA，pH 8
- 添加10毫克溴酚蓝
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至100 mL
10x DNA上样缓冲液：100 mL
- 在100 mL量筒中测量20 mL 50x TAE
- 添加40克蔗糖
- 添加10毫克溴酚蓝
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至100 mL
SDS-PAGE缓冲液1.5 M Tris，pH 8.8（用于分离凝胶的储备缓冲液）1 L
- 将181.65 g Tris碱溶于约800 mL 双蒸水（ddH2O）
- 用浓盐酸调节pH值至8.8
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至1 L注意：在进行最终的pH调节之前，请确保将溶液冷却至室温。
1.5 M Tris缓冲液，pH 6.8（用于堆叠凝胶的储备液）1 L
- 在约700 mL的双蒸水（ddH2O）中溶解181.65 g Tris碱
- 用浓盐酸将pH调节至6.8
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至1 L
10x Tris-甘氨酸运行缓冲液：用于4 L
- 121.1克Tris碱
- 576克甘氨酸
- 200 mL 20％SDS
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至4 L
2x样品上样缓冲液（非还原）：用于100 mL
- 5 mL 1 M Tris，pH 7
- 25 mL 20％SDS
- 20毫升甘油
- 2毫克溴酚蓝
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至100 mL
2x样品上样缓冲液（减少）：1 mL
- 950 µL 2x非还原样品上样缓冲液
- 50 µLβ-巯基乙醇
染色/脱色溶液：对于4 L：
- 200 mL无水乙醇
- 300毫升冰醋酸
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至4 L
定影液，1 L：
- 600 mL无水乙醇
- 75毫升冰醋酸
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至1 L
考马斯蓝原液：对于100 mL：
- 将250 mg考马斯亮蓝G-250（不是R-250！）溶解在100 mL固定液中
- 蛋白质印类迹缓冲液
- 121.1克Tris碱
- 576克甘氨酸
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至4 L
1x传输缓冲液：1 L
- 700毫升冷双蒸水（ddH2O）
- 100毫升10倍转移缓冲液
- 200毫升甲醇
20x TBS缓冲液：4升
- 193.6克Tris碱
- 640克氯化钠
- 使用双蒸水（ddH2O）将体积提高到3.2 L
- 用浓盐酸调节pH到7.6
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至4 L
20x TBST缓冲液：对于100 mL
- 将2 mL Tween-20加入100 mL的20x TBS中
三、大肠杆菌生长培养基系列
LB培养基：1升
- 10克胰蛋白p
- 5克酵母提取物
- 10克氯化钠
- 可选：用双蒸水（ddH2O）将体积调至900 mL左右，然后将pH调节至7.4
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至1 L
- 通过高压灭菌30分钟进行灭菌要制作LB琼脂，在高压灭菌之前添加15 g琼脂
LB培养基（低盐）：1升
- 10克胰蛋白p
- 5克酵母提取物
- 5克氯化钠
- 可选：用双蒸水（ddH2O）将体积调至900 mL左右，然后将pH调节至7.4
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至1 L
- 通过高压灭菌30分钟进行灭菌要制作低盐LB琼脂，请在高压灭菌之前添加15 g琼脂
SOC：1升
- 20克胰蛋白p
- 5克酵母提取物
- 0.5克氯化钠
- 0.186克KCl
- 0.952克氯化镁
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至900 mL左右，然后用10 N NaOH将pH调节至7.4
- 用双蒸水（ddH2O）将体积调至1 L
- 高压灭菌30分钟
- 在使用前立即添加20 mL无菌1 M葡萄糖
1 M葡萄糖：100 mL
- 将18 g葡萄糖溶于100 mL 双蒸水（ddH2O）
- 通过0.2 µ过滤或高压灭菌15分钟进行灭菌
四、抗生素类缓冲液
氨苄西林（1000x）缓冲液：
- 将5 g氨苄西林溶于25 mL 双蒸水（ddH2O）
- 添加25 mL无水乙醇
- 储存在-20°C
羧苄青霉素（液体培养基1000x，平板2000x）缓冲液：
- 将2.5 g羧苄青霉素溶于25 mL 双蒸水（ddH2O）
- 添加25 mL无水乙醇
- 储存在-20°C
氯霉素（1000x）缓冲液：
- 将1.7 g氯霉素溶于50 mL无水乙醇
- 储存在-20°C
卡那霉素（1000x，但自动诱导培养基为250x）缓冲液：
- 将1.25 g氨苄西林溶解在50 mL 双蒸水（ddH2O）中
- 通过0.2 µ过滤灭菌
- 储存在-20°C下，每份1.5 mL
四环素（1000x）缓冲液：
- 将0.75 g四环素溶于50 mL无水乙醇或异丙醇中
- 储存在-20°C的1.5 mL液体中
