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如何配制TBE缓冲液
Release Time：2019-11-22如何通过3个简单的步骤制作TBE缓冲液
TBE缓冲液（Tris-borate-EDTA）是由Tris碱，硼酸和EDTA（乙二胺四乙酸）组成的缓冲溶液。 TBE缓冲液通常用于琼脂糖凝胶电泳，以分析由PCR扩增，DNA纯化方案或DNA克隆产生的DNA产物。
1.TBE缓冲液有哪些用途
TBE缓冲液特别适用于分离较小的DNA片段（MW <1000），例如限制酶消化的小产物。 TBE具有更大的缓冲能力，并且比TAE缓冲具有更高的分辨率。 TAE（Tris-acetate-EDTA）缓冲液是由Tris碱，乙酸和EDTA组成的溶液。
TBE缓冲液相比TAE缓冲液的价格更贵，并且抑制DNA连接酶，如果打算进行后续的DNA纯化和连接步骤，则可能会出问题。 通过以下三个简单步骤，学习如何制作TBE缓冲区。 创建时间不会超过30分钟。
2. 配置TBE缓冲液需要什么材料？
在开始使用之前，请在实验室检查库存，以确保拥有所需的一切材料和仪器。 没有什么比在准备解决方案的过程中停下来更糟糕，因为用完了准备的材料，但缓冲液没配制好。
4. EDTA的储备溶液配置步骤
EDTA解决方案应提前准备，直到将pH值调整到8.0为止，EDTA才能完全进入溶液。对于0.5毫升EDTA的500毫升储备溶液，称出93.05克EDTA二钠盐（FW = 372.2）。然后将其溶于400毫升去离子水中，并用NaOH调节pH值。之后，加满溶液至最终体积为500毫升。
5. TBE缓冲液的储备溶液的配制过程
通过称量54克Tris碱（FW = 121.14）、27.5克硼酸（FW = 61.83）制成TBE的浓缩（5x）储备液，并将两者溶解在大约900毫升的去离子水中。然后加入20毫升0.5 M EDTA（pH 8.0），并将溶液调节至1升的最终体积。该溶液可以在室温下保存，但在较旧的溶液中会形成沉淀。将缓冲液保存在玻璃瓶中，如果形成沉淀，则将其丢弃。
6. TBE缓冲液的工作原理
对于琼脂糖凝胶电泳，可以使用TBE缓冲液，其浓度为0.5x（浓缩原液的1:10稀释度）。用去离子水将储备溶液稀释10倍。最终溶质浓度为45 mM Tris-borate和1 mM EDTA。
现在可以使用该缓冲液运行琼脂糖凝胶了。
TBE缓冲液（Tris-borate-EDTA）是由Tris碱，硼酸和EDTA（乙二胺四乙酸）组成的缓冲溶液。 TBE缓冲液通常用于琼脂糖凝胶电泳，以分析由PCR扩增，DNA纯化方案或DNA克隆产生的DNA产物。
1.TBE缓冲液有哪些用途
TBE缓冲液特别适用于分离较小的DNA片段（MW <1000），例如限制酶消化的小产物。 TBE具有更大的缓冲能力，并且比TAE缓冲具有更高的分辨率。 TAE（Tris-acetate-EDTA）缓冲液是由Tris碱，乙酸和EDTA组成的溶液。
TBE缓冲液相比TAE缓冲液的价格更贵，并且抑制DNA连接酶，如果打算进行后续的DNA纯化和连接步骤，则可能会出问题。 通过以下三个简单步骤，学习如何制作TBE缓冲区。 创建时间不会超过30分钟。
2. 配置TBE缓冲液需要什么材料？
- TBE缓冲液原料：EDTA二钠盐，Tris碱，硼酸和去离子水。
- TBE缓冲液需要的设备：pH计进行校准、 600毫升、1500毫升的烧杯、烧瓶、带刻度的量筒、搅拌棒、搅拌盘。
在开始使用之前，请在实验室检查库存，以确保拥有所需的一切材料和仪器。 没有什么比在准备解决方案的过程中停下来更糟糕，因为用完了准备的材料，但缓冲液没配制好。
4. EDTA的储备溶液配置步骤
EDTA解决方案应提前准备，直到将pH值调整到8.0为止，EDTA才能完全进入溶液。对于0.5毫升EDTA的500毫升储备溶液，称出93.05克EDTA二钠盐（FW = 372.2）。然后将其溶于400毫升去离子水中，并用NaOH调节pH值。之后，加满溶液至最终体积为500毫升。
5. TBE缓冲液的储备溶液的配制过程
通过称量54克Tris碱（FW = 121.14）、27.5克硼酸（FW = 61.83）制成TBE的浓缩（5x）储备液，并将两者溶解在大约900毫升的去离子水中。然后加入20毫升0.5 M EDTA（pH 8.0），并将溶液调节至1升的最终体积。该溶液可以在室温下保存，但在较旧的溶液中会形成沉淀。将缓冲液保存在玻璃瓶中，如果形成沉淀，则将其丢弃。
6. TBE缓冲液的工作原理
对于琼脂糖凝胶电泳，可以使用TBE缓冲液，其浓度为0.5x（浓缩原液的1:10稀释度）。用去离子水将储备溶液稀释10倍。最终溶质浓度为45 mM Tris-borate和1 mM EDTA。
现在可以使用该缓冲液运行琼脂糖凝胶了。
