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如何配制TAE缓冲液
Release Time：2019-11-22如何配制TAE缓冲液
1.TAE缓冲液简介
8.TAE缓冲液的应用领域
DNA的琼脂糖凝胶电泳
1.TAE缓冲液简介
- TAE是非常常见的电泳缓冲液之一，用于DNA的琼脂糖凝胶分析。
- TAE缓冲液包含有Tris，乙酸和EDTA。
- Tris-acetate提供导电性并可以保持pH值。
- TAE缓冲液中的EDTA通过螯合二价阳离子（Ca2 +，Mg2 +）来抑制金属依赖性核酸酶，从而在运行中保护DNA免受核酸酶的影响。
- TAE缓冲液的缓冲能力低于TBE，因此应避免将其用于长时间和重复的电泳。
- TAE缓冲液适用于需要使用DNA修饰酶修饰凝胶洗脱的DNA片段的应用， 在这种情况下，应避免使用TBE缓冲液，因为TBE缓冲液的硼酸盐会抑制许多酶（例如DNA连接酶）。
- 配制TAE缓冲液需要的材料
- 试剂种类：Tris碱（C4H11NO3，分子量：121.14）、冰醋酸（CH3COOH，分子量：60.05）、0.5 M EDTA储备溶液（pH 8.0）、去离子水/ Milli-Q水。
- 器具：一次性量筒、锥形烧瓶/烧杯、磁力搅拌器。
- 50X TAE缓冲液（原液）的组成
- 2.0 M醋酸三乙酸
- 0.05 M EDTA
- pH 8.2 – 8.4（在25°C下）
- 1X TAE缓冲液的组成（工作浓度）
- 40毫米醋酸三乙酸
- 1毫米EDTA
- pH 8.2 – 8.4（在25°C下）
- TAE缓冲液的制备
- 配制步骤1：
- 称量出242克Tris碱，并将其转移至2 L烧杯/锥形烧瓶中，加入750 ml去离子水/ Milli-Q水，混合直至所有Tris碱完全溶解。
- 配制注意事项：可以使用玻璃移液器手动摇动以混合成分。磁力搅拌器使溶解过程自动化且方便。
- 配制步骤2：
- 加入100 ml的0.5 M EDTA溶液和57.1 ml的冰醋酸,再次混合溶液,如果需要可将pH调节至8.3。
- 注意事项：由于pH值取决于温度，因此我们建议在室温（25°C）下调节溶液的pH值。
- 步骤3：
- 用去离子水/ Milli-Q水将溶液体积调节至1000 ml，再次混合溶液。
- 可选：可以过滤溶液以除去所有不溶的物质。
- 步骤4：
- 通过高压灭菌（液体循环中从121-124°C在15磅/平方英寸（psi）下20分钟）灭菌溶液。
- 可以通过0.22μ的过滤器对溶液进行灭菌。过滤除菌可去除所有大于0.22μ的悬浮颗粒，其中包括大多数细菌的孢子，但不包括支原体。而且，它不会使酶活性（例如DNase）失活。除某些酶（例如RNases）外，高压灭菌会使大多数酶失活，并杀死包括支原体在内的大多数微生物。
- 在高压灭菌之前，将溶液转移到可高压灭菌的瓶子中。
- 根据消耗量，可以制作小等分的溶液。
- TAE缓冲液的存储：
- 注意事项：
8.TAE缓冲液的应用领域
DNA的琼脂糖凝胶电泳
