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NHS-Biotin

已知生物素与抗生物素蛋白牢固结合,其特性已广泛用于高灵敏度分析。由于生物素与抗生物素蛋白之间的结合稳定性常数为1015,比抗原-抗体反应高3至4个数量级,因此一旦结合至抗生物素蛋白的生物素在生理条件下不会脱落。另外,生物素是具有羧基的小分子,可以容易地化学修饰,并且可以在不损害蛋白质等的活性的情况下进行标记。因此,已经开发出许多生物素化合物作为使用抗体进行免疫测定的标记剂。具有活性酯基的生物素通常用于与蛋白质的氨基(NH2)结合,具有马来酰亚胺基的生物素用于巯基(SH)。

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中文别名 35013-72-0;D-生物素 N-羟基琥珀酰亚胺酯;Biotin-NHS; Biotin N-hydroxysuccinimide ester; NHS-Biotin
英文别名 Biotin NHS;D-Biotin N-Succinimidyl Ester;D-Biotin N-Succinimidyl Ester;Biotin N-Succinimidyl D-biotin
CAS号 35013-72-0
Inchi InChI=1S/C14H19N3O5S/c18-10-5-6-11(19)17(10)22-12(20)4-2-1-3-9-13-8(7-23-9)15-14(21)16-13/h8-9,13H,1-7H2,(H2,15,16,21)/t8-,9-,13-/m0/s1
InchiKey YMXHPSHLTSZXKH-RVBZMBCESA-N
分子式 Molecular Weight C14H19N3O5S
分子量 Formula 341.38
溶解度Solubility Soluble in Dimethylformamide 50 mg/mL (Stable for at least one month in dry DMF). Soluble in Dimethyl sulfoxide(DMSO).
性状 Solid power
储藏条件 Storage conditions 储存温度-20°C ,充氩保存

产品概述
已知生物素与抗生物素蛋白牢固结合,其特性已广泛用于高灵敏度分析。由于生物素与抗生物素蛋白之间的结合稳定性常数为1015,比抗原-抗体反应高3至4个数量级,因此一旦结合至抗生物素蛋白的生物素在生理条件下不会脱落。另外,生物素是具有羧基的小分子,可以容易地化学修饰,并且可以在不损害蛋白质等的活性的情况下进行标记。因此,已经开发出许多生物素化合物作为使用抗体进行免疫测定的标记剂。具有活性酯基的生物素通常用于与蛋白质的氨基(NH2)结合,具有马来酰亚胺基的生物素用于巯基(SH)。
根据目的,有必要选择在抗生物素蛋白识别的生物素头和反应性基团之间的间隔物的长度,但是通常,间隔物越长,当抗生物素蛋白结合时,对抗体的抗原识别活性越强。可以认为,间隔物的影响可能引起非特异性吸附,并且在测量期间的背景可能很高。因此,为了提高测量灵敏度,请查看S/N(信噪比)。必须选择适当长度的垫片。

间隔基通常使用氨基己酸,并且存在一种化合物,其中一个分子的氨基己酸通过酰胺键被引入生物素中,并且该化合物中的两个分子被引入。由于己酸间隔物变长,水溶性变差,因此通常将生物素标记试剂溶解在DMSO中并添加到含有蛋白质的缓冲液中的方法是普遍的。

如果有机溶剂不能用于蛋白质的氨基标记,则可以使用带有磺酸基的活性酯化合物。此外,在与巯基的反应中,以相同的方式使用由DMSO制备的溶液,但是由于其在间隔部分具有哌嗪结构,因此通过质子化在中性区域显示水溶性。

用于还原糖的生物素酰肼化合物的水溶性低,需要在DMSO溶液中进行调节。

在ELISA(酶联免疫吸附测定)中,将酶标记的抗生蛋白链菌素与生物素标记的抗体结合的方法是常见的。与抗生蛋白链菌素相比,抗生物素蛋白便宜,但很少用于ELISA中。原因是背景极高,并且认为高PI是原因。抗生物素蛋白通常用于通过柱分离生物素结合蛋白等的目的。


原理

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产品使用步骤:

  1. 参照下表配制50mmol/l的生物素标记试剂溶液:

    1606964947767725.png

由于生物素标记试剂遇水易分解,所以需要现配现用。

 2. 蛋白质的生物素标记操作方法

1) 用10mmol/l Bicine Buffer (pH8.5) 溶解蛋白质,制成蛋白质溶液。

2) 在蛋白质溶液中加入配制好的生物素标记试剂溶液,蛋白质:生物素标记试剂的混合摩尔比为1:2-1:10。

3) 充分混合后,在水浴恒温摇床 (25 ℃) 中培养2-4 h。

 3. 标记蛋白质的凝胶过滤及纯化。

1) 打开层析柱上的盖子,弃去填充液。

2) 打开层析柱出口的盖子,用PBS分数次洗脱,每根层析柱收集大约10ml的洗脱液,使凝胶平衡。

3) 用移液器吸取500μl标记好的蛋白质溶液加入到层析柱中,弃去此时的流出液。

4) 在层析柱的出口处放置一个2ml的样品管,在层析柱中加入1ml PBS,收集流出的生物素标记蛋白质。


Biotin-Osu(MSDS,35013-72-0)(35013-72-0)实验注意事项:
1.实验前需戴好防护眼镜,穿戴防护服和口罩,佩戴手套,避免与皮肤接触。
2.实验过程中如遇到有毒或者刺激性物质及有害物质产生,必要时实验操作需要手套箱内完成以免对实验人员造成伤害。
3.取样品的移液枪头需及时更换,必要时为避免交叉污染尽可能选择滤芯吸头。
4.称量药品时选用称量纸,并无风处取药和称量以免扬撒,试剂的容器使用前务必确保干净,并消毒。
5.取药品时尽量采用多个药勺分别使用,使用后清洗干净后,烘干消毒存放。
6.实验后产生的废弃物需分类存储,并交于专业生物废气物处理公司处理,以免造成环境污染。
Experimental considerations:
1. Wear protective glasses, protective clothing and masks, gloves, and avoid contact with the skin during the experiment.
2. The waste generated after the experiment needs to be stored separately, and handed over to a professional biological waste gas treatment company to avoid environmental pollution.
产品说明 D-生物素 N-羟基琥珀酰亚胺酯(MSDS,35013-72-0)(35013-72-0):仅做科学研究以及化学合成中间体使用,35013-72-0其他参数见主页
IntroductionD-Biotin N-Succinimidyl Ester(35013-72-0);D-Biotin N-Succinimidyl Ester:(35013-72-0) used for scientific research and chemical synthesis intermediates
Application1可用于蛋白、抗原、抗体、核酸(DNA、RNA)等的标记, 用于蛋白质和多肽的生物素标记。在pH值范围6.5-8.5条件下,偶联到蛋白质和多肽的氨基上
Application2用于蛋白质和多肽的生物素标记
Application3在pH值范围6.5-8.5条件下,偶联到蛋白质和多肽的氨基上
1. Ngo TT et al. Biotinyl-glucose-6-phosphate dehydrogenase preparation, kinetics, and modulation by avidin. Appl Biochem Biotechnol. 1982 Nov;7(6):443-54.
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