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HE染色石蜡切片的制作

Release Time:2020-07-14

一、HE染色石蜡切片简介


二、HE染色石蜡切片制作所需材料及试剂设备用具:
切片机、恒温箱、溶蜡箱、玻璃缸、载玻片、盖玻片、手术刀片、镊子、包埋盒。试 剂 :10%福尔马林、酒精、二甲苯、固体石蜡、苏木精、酸水、氨水、酒精伊红染色剂型、加拿大树胶


三、HE染色石蜡切片制作步骤:
1.取材与固定取动物新鲜组织块(一般厚度不超过0.5厘米)投入预先配好的固定液中(10%福尔马林,Bouin氏固定液)使组织、细胞的蛋白质变性凝固,以防止细胞死后的自溶或细菌的分解,从而保持细胞本来的形态结构。2.脱水透明 一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂,逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精,又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明,以二甲苯替换出组织块的中酒精,才能浸蜡包埋。3.浸蜡包埋将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中,放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋:先制备好容器(如折叠一小纸盒),倒入已溶化的石蜡,迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬,才能在切片机上切成很薄的切片。4.切片与贴片: 将包埋好的蜡块固定于切片机上,切成薄片,一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折,要放到加热的水中烫平,再贴到载玻片上,放45℃恒温箱中烘干。5.脱蜡 常用HE染色,以增加组织细胞结构各部分的色彩差异,利于观察。苏木精(Hematoxylin,H)是一种碱性染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色,被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin,E)是一种酸性染料,能将细胞质染成红色或淡红色,被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。染色前,须用二甲苯脱去切片中的石蜡,再经由高浓度到低浓度酒精,最后入蒸馏水,就可染色。6.染色HE染色过程是:①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。②酸水及氨水中分色,各数秒钟。③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。④入70%和90%酒精中脱水各10分钟。⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。7.脱水透明: 染色后的切片经纯酒精脱水,再经二甲苯使切片透明。8.封固: 将已透明的切片滴上加拿大树胶,盖上盖玻片封固。待树胶略干后,贴上标笺,切片标本就可使用。


四、HE染色石蜡切片制作所需试剂清单
序号 产品名 货号 CAS 备注
1 二甲苯 JT24017 1330-20-7  
2 乙醇 JT26000 64-17-5  
3 苏木精 SX0217 517-28-2  
4 切片石蜡 CG0207 8002-74-2  
5 氨水 JT8652 1336-21-6  
6 加拿大树胶 SS6095    


 
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