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如何使FISH达到最佳效果

Release Time:2020-07-14

一、实验原理
FISH检测对被测样本没有特殊的要求。可以是来自骨髓的细胞,也可以是来自羊水的细胞;可以是冰冻切片的样本,也可以是经过石蜡包埋的样本。甚至可以利用尿液样本进行膀胱癌复发的预后。获取的样本细胞也无需经过培养扩增,FISH检测可以显示单个细胞核内染色体的异常情况。
二、样本的老化(目的是为了使FISH达到最佳效果)
1. 将样本片子放入2×SSC 37℃1小时
2. 将片子放入新制的胃蛋白酶工作液中(20ul 10%胃蛋白酶溶液中加入40ml0.01NHCl)37℃13分钟
3. 用磷酸盐平衡液(PBS)室温下清洗5分钟
4. 将片子放入快速固定液(0.95%甲醛:1ml的37%甲醛,0.18gMgCl2和39ml的PBS,4℃保存,一个月内使用)室温5分钟
5. 在室温下用PBS清洗5分钟
6. 晾干片子。为了加速晾干可以用带棉塞的巴氏移液管吹打玻片
7. 将片子浸泡在70%的乙醇中。用乙醇冲洗1分钟
8. 从70%乙醇中取出,依次放入85%、100%乙醇中重复以上步骤
9. 根据需要降解片子

三、实验所需试剂和耗材:
序列 产品名 货号 CAS号 备注
1 胃蛋白酶 HC0767    
2 MgCl2 JT2113 7786-30-3  
3 乙醇 CCF12679 127852-29-3  
4 FT-200 200ul黄吸头    
5 F-EP020 2ml圆底连盖离心    
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