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HABA法检测生物素标记
Release Time：2020-07-11一、试剂配制：
1. PBS（100 mM 磷酸盐，150 mM Nacl pH7.2）
2. HABA/亲和素溶液：10 mg 亲和素、600 ul10 mM HABA于19.4 ml 的PBS中，该溶液的A500大约在0.9~1.3之间，溶液于4℃保存可稳定2周。如果有沉淀形成（HABA溶液）可过滤后使用。
二、实验所需试剂列表：
| 序列 | 产品名 | 货号 | CAS号 | 备注 |
| 1 | 磷酸盐缓冲液 | HC1789 | ||
| 2 | HABA | HCT006066 | 927821-99-6 | |
| 3 | Nacl | JT0001 | 7647-14-5 | |
| 4 | 1000ul蓝吸头 | FT-1000 | ||
| 5 | 200ul黄吸头 | FT-200 | ||
| 6 | 2ml圆底连盖离心 | F-EP020 | ||
| 7 | 1.5ml尖底连盖离心管 | F-EP015 |
三、比色法检测生物素/蛋白质摩尔质量比：
1. 吸取900 ul HABA/亲和素溶液于1ml比色杯。
2. 测定该溶液在500 nm 处的吸收值并记录为“A500 HABA/Avidin”。
3. 吸取100 ul 生物素标记的蛋白于杯中并测定500 nm 的吸光度值，记为A500 HABA/Avidin/Biotin （数值必须恒定15s 以上）如果A500 HABA/Avidin/Biotin的值不超过（≤）0.3，重新稀释待测样品并检测。
注：计算结果时必须考虑稀释度。
4. 计算Biotin/Protein摩尔比
①A=生物素化的蛋白毫摩尔浓度＝蛋白浓度（mg/ml）/蛋白的分子量
②B=500nm处的吸光度变化
△A500=（0.9×A500HABA/Avidin）-A500HABA/Avidin/Biotin
③C=生物素的毫摩尔浓度=mmol Biotin/ml反应溶液=△A500/（34,000×光程）
④Biotin/Protein摩尔比=C•10•稀释倍数/
