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1. 电泳
制备并运行SDS PAGE凝胶。选择一种凝胶百分比，该凝胶百分比将为所分析的抗原大小提供最佳分辨率（如果已知）。如果尺寸未知，12%的凝胶是一个良好的起点。装载足够的蛋白质，每孔提供0.1-1ng抗原。加载样品的连续稀释通常是有利的，以确保至少有一条车道处于最佳检测范围内。如果需要，使用预处理标记，如国家诊断的原标记，以监测转移效率。

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2. 转移
运行完成后，凝胶必须转移到吸液膜上。这可以通过半干转移或湿转移来实现。两者都是电泳转移，需要为此目的设计的设备。以下概述的程序旨在作为概述。为了获得最佳效果并确保安全，请遵循设备制造商在此阶段的说明。

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3. 半干砌块
用去离子水冲洗电极板。
将六张沃特曼3MM纸和一张吸墨纸切成凝胶大小（或稍小）。
弄湿薄膜。将硝化纤维素浸泡在去离子水中3分钟。将PVDF浸泡在甲醇中1分钟。将膜转移至转移缓冲液（由0.02M三碱、0.15M甘氨酸和20%甲醇组成）中，浸泡3分钟。

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4. 组装转移管
在下板（正极，红色导线）上，按以下顺序放置这些项目：
三张3MM的纸（预先切割并用转移缓冲液润湿）
转移膜

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5. 凝胶
三片3MM（预切割并用转移缓冲液润湿）
用10ml移液管在每层上滚动，去除所有气泡。小心不要打乱吸管，或让凝胶粘在吸管上。如果需要，在放置第一层上层纸后，将凝胶卷起来。请注意，被困在烟囱中的气泡会扭曲电流，导致横向频带位移和频带传输失败。
检查以确保上纸叠的任何部分都不会接触到凝胶下方的纸张或电极。上下堆栈之间的触点将短路电流，从而扭曲传输。在某些系统中，可在凝胶周围布置副膜或塑料膜，以防止发生短路。检查说明。
将上部（负极，黑色引线）电极板放在堆栈顶部，并通电。查阅仪器说明书；典型的条件是0.8mA/cm2下1小时。过度转移可能会使凝胶干燥，并使蛋白质通过硝化纤维膜。

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