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DAPI溶液(配制,使用方法,步骤)

Release Time:2022-06-29
DAPI溶液配制以及DAPI溶液使用方法:
1. DAPI 产品介绍:
DAPI (28718-90-3,DAPI Dihydrochloride)是一种荧光 DNA 染料,可与双链 DNA 的小沟结合,优先选择富含腺嘌呤和胸腺嘧啶 (AT) 的 DNA。 DAPI 常用于显微镜和流式细胞术。 DAPI 可用于固定细胞或活细胞,尽管它在活细胞中的跨膜效率较低并且需要使用更高的浓度。采用DAPI配制 DAPI染色液:浓度为5 mg/ml,推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。
备注:DAPI溶解度
  • DMF: 0.2 mg/ml
  • DMSO: 3 mg/ml
  • Ethanol: 0.2 mg/ml

2. DAPI溶液一般使用:ddH2O配制,溶液的浓度为 5mg/ml,推荐DAPI溶液工作浓度为0.5-10μg/ml之间。DAPI,也被称为:DAPI dihydrochloride,DAPI是一种可穿透细胞膜的蓝色荧光染料,与双链DNA进行结合以后,可产生比 DAPI 自身强超过20倍的荧光。与传统的 EB (溴化乙锭,ethidium bromide)进行比较,DAPI 对双链DNA 的染色灵敏度要比EB的染色灵敏度高很多倍。因 DAPI 是含有特定 AT序列DNA 的一种嵌入剂,DAPI 可以像 Hoechst染料 一样粘附在DNA双螺旋的小沟区上。
虽然 DAPI 不能通过活细胞膜,但 DAPI 可以穿透扰乱的细胞膜而对核进行染色。DAPI 具有较高的光漂白承受能力,可以用于检测 酵母线粒体DNA,病毒DNA,叶绿体DNA,microplasm DNA 及 染色体DNA。DAPI与DNA偶联物的激发和发射波长分别为:360nm/460nm。
DAPI染色实验经常应用于细胞凋亡检测,流式细胞仪检测以及染色后用荧光显微镜观察等。当然 DAPI 也用于普通 细胞核染色 及特定情况下双链DNA的染色使用。
3. DAPI 结构式:

4. DAPI溶液 使用步骤:
a. 取1mg的DAPI粉末,离心使粉末沉积在保存管底,后取1mL 的ddH2O将 DAPI粉末溶解,可以制备出 2.9mM的DAPI溶液(1mgDAPI/1mL H2O)。 备注:※ 不使用的制备液需要按照每次试验需求量分装存储,以免反复冻融对试剂活性造成影响;
※ DAPI 不可以用 PBS缓冲溶液或者其他缓冲液直接进行溶解,需要先用水将其溶解。 
b. 取需要量的 DAPI溶液 加入 PBS缓冲液中,制得 10~50µM的 DAPI溶液。
※ 可选择采用以下方法配制 PBS缓冲液: 称取:8.00g NaCl,0.20g KCl,0.2g KH2PO4以及2.9g Na2HPO4·12H2O,溶于1L纯水中制得。 
c. 量取 1/10培养基体积 的 DAPI溶液 加至细胞培养基里,当然也可采取 1/10浓度 的 DAPI缓冲液 替代培养基。
d. 在37℃恒温条件下,培养细胞约10~20分钟,可根据实验调节培养时间。
e. 之后再用 PBS缓冲液 或其他 适合的缓冲液 对细胞清洗2-3次。
f. 最后使用荧光显微镜进行观察细胞,荧光显微镜需带有 360nm激发波长和460nm发射波长的滤光片的。
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