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如何配制PMSF缓冲液？
Release Time：2019-11-25PMSF缓冲液介绍
在生物化学中，PMSF（苯基甲磺酰氟或苯基甲基磺酰氟）是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，通常用于制备细胞裂解液。 PMSF并不抑制所有丝氨酸蛋白酶，它在水中迅速降解，储备溶液通常由无水乙醇，异丙醇，玉米油或DMSO组成。 当PMSF的浓度在0.1 – 1 mM之间时，会发生蛋白水解抑制作用。 在水溶液中的半衰期很短（pH = 7时为110分钟，pH = 8时为35分钟）。
PMSF特异性结合丝氨酸蛋白酶中的活性位点丝氨酸残基，但不结合蛋白中的任何其他丝氨酸残基。 由于PMSF在活性丝氨酸残基上与酶共价结合，因此可以通过X射线晶体学观察该复合物。 因此，它可以用作化学标记，以鉴定酶中必要的活性位点SER。
Enzyme(active) Ser-O-H + F-SO2CH2C6H5 ->EnzymeSer-O-SO2CH2C6H5 + HF
丝氨酸蛋白酶+ PMSF->不可逆酶-PMS复合物+ HF
PMSF是一种细胞毒性化学物质，只能在通风橱内处理， 该化合物的LD50小于500 mg / kg。
配制PMSF（10 mM），10 ml：
在生物化学中，PMSF（苯基甲磺酰氟或苯基甲基磺酰氟）是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，通常用于制备细胞裂解液。 PMSF并不抑制所有丝氨酸蛋白酶，它在水中迅速降解，储备溶液通常由无水乙醇，异丙醇，玉米油或DMSO组成。 当PMSF的浓度在0.1 – 1 mM之间时，会发生蛋白水解抑制作用。 在水溶液中的半衰期很短（pH = 7时为110分钟，pH = 8时为35分钟）。
PMSF特异性结合丝氨酸蛋白酶中的活性位点丝氨酸残基，但不结合蛋白中的任何其他丝氨酸残基。 由于PMSF在活性丝氨酸残基上与酶共价结合，因此可以通过X射线晶体学观察该复合物。 因此，它可以用作化学标记，以鉴定酶中必要的活性位点SER。
Enzyme(active) Ser-O-H + F-SO2CH2C6H5 ->EnzymeSer-O-SO2CH2C6H5 + HF
丝氨酸蛋白酶+ PMSF->不可逆酶-PMS复合物+ HF
PMSF是一种细胞毒性化学物质，只能在通风橱内处理， 该化合物的LD50小于500 mg / kg。
配制PMSF（10 mM），10 ml：
- 量取17.4 mg PMSF
- 加入异丙醇至10ml并溶解。
- 无需过滤消毒。
- 分装并储存在–20°C。
