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如何配制SDS-PAGE上样品缓冲液

Release Time:2019-11-25
SDS-PAGE样品缓冲液(莫里斯法)
制备上样缓冲液的目的:
  • 用于将蛋白质样品制备和上样到凝胶上以进行SDS-PAGE分析(蛋白质印迹/蛋白质印迹)。
  • 制备:样品缓冲液中包含的SDS使蛋白质与其长度成比例地带负电荷。 2-巯基乙醇/ DTT破坏二硫键。
  • 上样:甘油使样品缓冲液比蛋白质凝胶周围的运行缓冲液更稠密,从而易于装载到凝胶袋中。
制备SDS-PAGE缓冲液所需的材料:
  • 制作10ml,4x缓冲
     2.0 ml 1M Tris-HCl pH 6.8、0.8克SDS、4.0毫升100%甘油、0.4 ml 14.7 Mβ-巯基乙醇、1.0毫升0.5 M EDTA、8毫克溴酚蓝
  • 制备1x缓冲液:50 mM的Tris-HCl pH 6.8
      2%SDS、10%甘油、1%β-巯基乙醇、12.5毫米EDTA、0.02%溴酚蓝。
如何使用SDS-PAGE缓冲液
      将蛋白样品1:3稀释到4X样品上样缓冲液中,加载到SDS-PAGE缓冲液中的丙烯酰亚胺凝胶上。
配制和实用SDS-PAGE缓冲液注意事项:
      β-巯基乙醇是一种严重刺激物,很容易通过皮肤吸收SDS是固体形式的呼吸道刺激物,称重时应戴口罩。


 
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